郭苹，程鹏，王鹏飞，陈小兵

（1.南阳医学高等专科学校第一附属医院 肿瘤内科，河南 南阳 473007；2.河南省肿瘤医院 消化内科，河南 郑州 450022）

长链非编码RNA（long noncoding RNA, LncRNA）长度＜200 nt，其表达失调可引起多种疾病的发生和发展[1-2]。母系表达基因3（maternal expression gene 3,MEG3）属于非编码RNA，在多种肿瘤中表达降低或缺失，而其高表达可抑制多种肿瘤的增殖和生长[3-7]。胃癌中LncRNA-MEG3的研究相对较少。有研究表明，LncRNA-MEG3在胃癌细胞及组织中表达降低，而过表达LncRNA-MEG3可抑制癌细胞增殖，阻滞细胞周期，但目前LncRNA-MEG3对胃癌细胞凋亡及其化疗敏感性尚不清楚[8-9]。因此，本研究旨在研究过表达LncRNA-MEG3对胃癌细胞生长及顺铂化疗敏感性的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

RPMI 1640培养基（美国Bibco公司），胎牛血清、LipofectamineTM2000及Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒（美国Invitrogen公司），顺铂（美国Sigma公司），细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK8）（美国Coring公司），二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, BCA）试剂盒（上海碧云天公司），STAT3、磷酸化的信号转导与转录因子3（phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3, p-STAT3）、Cyclin D1及Bcl-2抗体（美国Abcam公司），酶标仪（美国Thermo公司），流式细胞仪（美国Beckman Coulter公司）。

1.2 细胞培养

人正常胃黏膜上皮细胞GES1和胃癌MKN28、SGC7901、AGS及BGC823细胞购自中国科学院上海细胞库。将在液氮罐中保存的GES1、MKN28、SGC7901、AGS及BGC823细胞解冻，解冻后的细胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基中，于37℃、5%二氧化碳CO2培养箱中传代培养。

1.3 实时荧光定量聚合酶链反应

采用Trizol法提取 MKN28、SGC7901、AGS及BGC823细胞总RNA，紫外分光光度计检测RNA质量，逆转为cDNA，以cDNA为模板进行实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR），反应体系为20μl，反应条件：95℃预变性30 s，95℃变性5 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共40个循环，LncRNA-MEG3正向引物：5′-GCCTGCTGCCCATCTACAC-3′，反向引物：5′-CCTCTTCATCCTTTGCCATC-3′；内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶正向引物：5′-AGCCACA TCGCTCAGACAC-3′，反向引物：5′-GCCCAATAC GACCAAATCC-3′。引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。……