张启德，葛蓉，王建宁

肿瘤免疫治疗已成为继手术、放化疗治疗后第4大肿瘤疗法之一[1]。目前应用最广泛的免疫检查点抑制剂，包括CTLA-4、PD-1及其配体PD-L1抑制剂。恶性肿瘤及其微环境中过度表达的程序性死亡配体-1(programmed death ligands 1，PD-L1)与程序性死亡受体-1(programmed death 1，PD-1)结合，激活下游通路，下调抗肿瘤免疫反应，使肿瘤逃逸人体免疫监视及杀伤，促进肿瘤生长。PD-1及PD-L1在多种胃肠道恶性肿瘤中上调，阻断PD-1/PD-L1信号通路为肿瘤免疫治疗提供可能[2]。胃癌作为我国常见恶性肿瘤之一，其预后也与细胞错配修复功能缺失有关[3]。目前已发现错配修复基因有多种，错配修复蛋白hMSH2、hMLH1参与DNA错配修复过程，是其中关键蛋白[4]。因此了解胃癌患者PD-1、PD-L1和错配修复蛋白hMSH2、hMLH1表达与肿瘤临床病理特征的关系，可能为临床选择应用PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂治疗优势人群提供依据。

1 资料与方法

1.1 组织标本 收集南京市江宁医院2015年1月至2016年12月，胃癌根治术后组织学证实为胃癌的石蜡标本76例。所有标本均经4%甲醛固定、石蜡包埋，制成5 μm切片、HE染色后，由两位具有高级职称的病理医师进行病理学诊断。

1.2 免疫组化法检测PD-L1、PD-1和错配修复蛋白hMSH2、hMLH1蛋白表达 免疫组化过程按照PV-9000试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)说明书进行。石蜡切片常规脱蜡水化、3% H2O2避光孵育10 min，PBS缓冲液清洗3次，加入一抗PD-L1、PD-1、hMSH2或hMLH1(均购于英国Abcam公司)，1∶100稀释，PBS作空白对照；4 ℃冰箱过夜，37 ℃复温60 min，应用DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。

1.3 免疫组化结果判定 免疫组化标本由两位高级职称病理科医师独立阅片判定。……