王立明，姚国忠，徐清华，吴 醒

（江苏省溧阳市人民医院普外科，江苏 溧阳 213300）

结直肠癌是临床上常见的一种恶性肿瘤。该病具有很高的发病率。目前，结直肠癌的发病机制尚不明确。大部分结直肠癌患者的病情被确诊时已到中晚期。目前，临床上对结直肠癌患者常进行手术治疗，但其预后较差。Beclin1（自噬基因）是一种多功能蛋白。其具有调节细胞自噬的作用[1 ]。有资料显示，Beclin1的表达可抑制患者癌组织的增殖、侵袭及迁移[2]。在本次研究中，笔者主要探讨Beclin1在结直肠癌组织中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2012年2月至2013年11月期间江苏省溧阳市人民医院普外科收治的50例结直肠癌患者作为研究对象。这些研究对象中，有男34例，女16例；其年龄为41～80岁，平均年龄为（59±2.23）岁；其中有低分化腺癌患者32例，有中高分化腺癌患者18例；其中肿瘤TNM分期为Ⅰ期及Ⅱ期的患者共有16例，为Ⅲ及Ⅳ期的患者共有34例。本研究经过江苏省溧阳市人民医院医学伦理委员会的批准。

1.2 方法

采集患者结直肠癌组织及正常组织将其制作成石蜡标本。在为患者采集标本前，其均接受了癌症根治性手术，且其在术前未接受放、化疗等抗肿瘤治疗。将制作完成的石蜡标本放置在-80℃的环境下进行冷冻保存。本次研究采用的试剂为：购自美国CST公司的Beclin1单克隆抗体、PBS（磷酸盐平衡生理盐水）、DAB（辣根过氧化物显色试剂盒）、二甲苯及购自福州迈新生物技术开发有限公司的免疫组化SP染色试剂盒等。制作组织标本的方法为：用已知直肠癌组织的切片作为阳性对照，用PBS代替一抗，并作为阴性对照。将石蜡标本进行切片，切片的厚度为4～7 μm。将组织切片经脱蜡、水化、高压修复后加入一抗。然后放入4℃的冰箱孵育过夜。将组织切片在37℃的环境下放置回温后加入二抗，在37℃的温箱中孵育30 min。用DAB对组织切片进行染色，再用苏木素重复染色3 min。用酒精将组织切片进行梯度脱水干燥后，用二甲苯将其透明（透明化）10 min。将组织切片用中性树胶密封在载玻片和盖玻片之间，放入60℃的烘箱中烤干，获得组织标本。将组织标本放在200倍的显微镜下进行观察。

1.3 观察指标

1）Beclin1的表达为阳性指的是上述组织标本中细胞质或细胞核出现黄褐色颗粒。根据组织标本被染色的深浅，将无着色的组织记为0分，将黄色的组织记为1分，将黄褐色的组织记为2分。在显微镜视野下，未染色的组织记0分，染色组织的占比＜10%的记1分，占比11%～50%的记2分，占比51%～75%的记3分，占比76%～100%的记4分。将上述两项的得分相乘为总分，总分为0分表示Beclin1的表达为阴性，总分为1～4分表示Beclin1的表达为弱阳性（+），得分为5～8分表示Beclin1的表达为强阳性（++）。2）对这50例患者进行5年的随访，观察Beclin1表达为阳性的患者与Beclin1表达为阴性患者的总生存期。

1.4 统计学分析

对本次研究中的数据均采用SPSS19.0统计软件进行处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，采用t检验，计数资料用百分比（%）表示，采用χ²检验。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Beclin1在这50例患者结直肠癌组织及正常组织中的表达

在这50例患者的结直肠癌组织标本中，Beclin1表达为阳性的患者有18例，为阴性的患者有32例。在Beclin1表达为阳性的患者中，Beclin1表达为强阳性的患者有11例，为弱阳性的患者有7例。这50例患者结直肠癌组织和正常组织中Beclin表达的阳性率分别为36%（18/50）和82%（41/50），差异具有统计学意义（P＜0.05）。详见图1和图2。

图1 患者癌组织中Beclin1的表达

图2 患者正常组织中Beclin1的表达

2.2 Beclin1的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。

Beclin1在患者结直肠癌组织中的表达与其肿瘤组织浸润的深浅、TNM分期、是否发生淋巴结转移、分化的程度具有相关性(P＜0.05)，与其年龄及肿瘤组织是否发生脉管侵犯不具有相关性（P＞0.05）。详见表1。

表1 Beclin1的表达与结直肠癌临床病理特征的关系（n）

2.3 Beclin1的表达与患者预后的关系

在这50例患者中，结直肠癌组织中Beclin1表达为阴性患者的死亡率为10%（5/50），为阳性患者的死亡率为6%（3/50）。采用Kaplan-Meier生存分析法评估患者的总生存期发现，Beclin1表达为阳性的患者其总生存期与Beclin1表达为阴性的患者相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

Beclin1广泛分布于人体的组织中[3]。有研究资料显示，癌症患者癌组织中Beclin1的表达通常低于其正常组织[4]。将患者的癌组织进行体外培养可发现beclin1的缺失可减少人体细胞的自噬。有实验证实，与正常小鼠相比，beclin1杂合子小鼠的表型虽相近，但其肿瘤的发生率及HBV（乙型肝炎）的发生率均较高，其细胞增生较多且细胞自噬较少[5]。有资料显示，Beclin1可抑制患者肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移[6-7]。在本次研究中，笔者认为Beclin1的表达与其肿瘤组织浸润的深浅、TNM分期、是否发生淋巴结转移、分化的程度具有相关性。患者结肠癌组织中Beclin1的表达为强阳性表示其预后较好。笔者的观点与研究资料的观点基本一致。另有研究表明，Beclin1在癌组织中表达的阳性率较正常组织高[8]。这一研究结果与本文的研究结果存在差异。笔者认为，Beclin1的表达可抑制患者结直肠癌组织的生成和转移，进而提高其总生存期。本次研究的结果显示，Beclin1在患者结直肠癌组织及正常组织中表达的阳性率分别为36%和82%，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Beclin1在患者结直肠癌组织中的表达与其肿瘤组织浸润的深浅、TNM分期、是否发生淋巴结转移、分化的程度具有相关性(P＜0.05)，与其年龄及肿瘤组织是否发生脉管侵犯不具有相关性（P＞0.05）。Beclin1表达为阳性的患者其总生存期与Beclin1表达为阴性的患者相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。在今后的研究中，我们将通过RNA干扰技术建立Beclin1表达的模型，用来检测细胞转染后肿瘤细胞的侵袭能力，以进一步验证Beclin1的表达与结直肠癌临床病理特征的相关性。综上所述，对结直肠癌患者进行Beclin1的检测可评估其病情的进展情况及预后。