梅文枫， 朱一平， 尹帮旗， 许晓刚， 方树彬

程序性死亡蛋白1(programmed death 1，PD-1)信号通路成为肿瘤免疫治疗的热点之一，肿瘤细胞表面的程序性死亡配体1(programmed death ligand 1，PD-L1)通过与PD-1的结合抑制了肿瘤特异性CD8+T细胞的免疫活性，介导了免疫逃逸，抗PD-1/抗PD-L1抗体通过阻断负性免疫调节信号，阻断免疫逃逸而杀伤肿瘤[1]。目前国际上已有5个抗PD-1/PD-L1抗体药物获批上市，开发此类药物具有广阔前景。

工程中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary，CHO)由于能进行正确的翻译后修饰，如蛋白折叠、糖基化，且重组蛋白分泌至胞外便于纯化，已成为抗体药物首选表达宿主[2-3]。为建立高表达、稳定、质量可控的重组CHO细胞株及培养工艺，前人已进行了大量的工作，包括从营养底物优化[4-7]、代谢工程[8-10]、过表达抗凋亡基因[11-12]、信号转导[13]等方面改善CHO细胞表现。

为建立高产稳定的细胞培养工艺，有必要进行氨基酸代谢分析，其将有助于确定营养限制性成分。本研究在前期培养基筛选基础上，在5种商业培养基中流加培养6株表达抗PD-1抗体的GS-CHO细胞，并进行代谢分析，有助于深入理解GS-CHO的代谢和营养需求，对后续细胞培养工艺及个性化培养基的开发优化提供理性指导。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1细胞株 实验所用宿主细胞为LONZA公司的GS基因敲除的CHOK1SV GS-KO(GS-CHO)，表达抗人PD-1抗体的重组GS-CHO细胞株由实验室自行构建，抗体重链、轻链表达质粒转染宿主细胞，经有限稀释法得到6株表达量较高的不同单克隆，分别命名为121，122，123，125，126，129。

1.1.2试剂 Cellvento CHO-210 Chemically Defined Medium(批号:F1875785510)，Cellvento Feed-210 Chemically Defined Feed(批号:F1876188515)均购自德国Merck Millipore公司；CD011无血清培养基(批号:150415400PM)，CD Feed 002补料培养基(批号:150320400PM)均购自中国甘肃健顺生物科技有限公司；……