黄海鹏， 付伟金， 韦康来， 徐小龙， 陈文元

肾癌是最常见的肾脏恶性肿瘤，约占肾脏恶性肿瘤的80%，而肾癌中约80%为肾透明细胞癌(clear renal cell carcinoma, CRCC)[1]。目前临床上关于CRCC的治疗虽然取得了一定的成效，但仍缺乏对CRCC所涉及的分子和细胞机制的研究[2]。有研究认为，有丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶3(mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase kinase kinase 3, MEKK3)可能与恶性肿瘤的发生发展密切相关[1-2]。研究表明，MEKK3在CRCC患者中过表达，提示MEKK3在多种恶性肿瘤包括CRCC的发生发展中可能发挥重要作用[3-4]。为探讨MEKK3的表达情况与CRCC的关系，本研究拟检测CRCC组织中MEKK3的表达，探讨其与CRCC的临床病理特征及预后之间的关系，报道如下。

1 对象与方法

1.1对象 收集2010年1月1日-2016年12月31日实行根治性肾切除术的标本70例，男性43例，女性27例；年龄中位数58岁(34～79岁)。肿瘤部位：左侧34例，右侧36例。根据2010年AJCC推荐的TNM分期系统进行分期，其中Ⅰ期18例，Ⅱ期25例，Ⅲ期19例，Ⅳ期8例。患者均经病理确诊为CRCC，术前均未接受化疗或放疗。同时取30例癌旁正常组织(距离肿瘤边缘≥2 cm)为对照组，男性19例，女性11例；年龄中位数57岁(42～68岁)。本研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学染色 取肾癌组织及癌旁正常肾组织各0.2 g，平均分成2份，一份迅速置于-80 ℃低温冰箱保存，提取蛋白行免疫印迹检测；另一份置于10%中性甲醛中固定，行免疫组织化学检测。所有组织均经10%中性甲醛缓冲液固定，常规脱水、浸蜡，石蜡包埋，切片厚度4 μm。采用SP法，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照染色。一抗为MEKK3(美国Abcam公司)，稀释为1∶50，二抗为快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物和……