林怡婷， 林雨虹， 阮 梅， 朱艳阳， 张秋玉,2

结直肠癌是常见的恶性肿瘤，其发病率逐年增加。2015年美国《临床医师癌症杂志》公布的研究报告显示，2000-2011年，我国结肠癌的发病率和死亡率已跃居恶性肿瘤第5位[1]。肝脏是结肠癌最常见的转移部位，肝转移是结肠癌患者最主要的死因，肝转移患者的平均生存期仅为4～7月[2-3]。有关结肠癌肝转移的作用机制尚不明确。既往用于研究结肠癌肝转移的动物模型多采用免疫缺陷的小鼠进行荷瘤。这些模型存在T或B细胞功能缺陷，无法用于分析转移灶组织免疫微环境的改变及探讨免疫治疗措施的疗效[4]。本研究首先构建并筛选具有稳定表达萤火虫荧光素酶(firefly luciferase, FLuc)的小鼠结肠癌细胞(MC38-luc)；其次，通过脾内注射途径建立小鼠结肠癌肝转移模型，应用小动物活体成像技术实时观察小鼠结肠癌细胞发生肝转移过程。该研究结果将为后续深入探讨结肠癌肝转移的免疫学机制及免疫治疗策略奠定一定的实验基础。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1动物 6～8周龄雌性C57BL/6小鼠，体质量20～22 g[上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2012-0002]，饲养于福建医科大学实验动物中心，动物伦理审查号为2017-031。

1.1.2细胞系及试剂 MC38小鼠结肠癌细胞为本实验室长期保存细胞系；pGL4.50-luc2/CMV/Hygro质粒及荧光素酶报告基因检测试剂盒(美国Promega公司)；Lipofectamine 2000转染试剂(美国Invitrogen公司)；无内毒素质粒中量抽提试剂盒(北京天根生化技术研究所)；D-luciferin(美国Perkin Elmer公司)；RPMI 1640培养液及添加剂、LB培养基、潮霉素、氨苄青霉素和水合氯醛(美国Sigma公司)；……