张 健， 曾育琦， 沈 辉， 康德勇， 张 静， 陈晓春

多发性硬化(multiple sclerosis，MS)是中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病，是引起中青年人致残的主要原因，其发病机制尚未完全阐明。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)具有与人类MS相似的临床病理及免疫学特征，是模拟MS较好的动物模型。目前认为，致炎性T淋巴细胞介导的免疫反应是MS及EAE的主要发病机制。1型辅助性T细胞(helper T cells，Th1)和Th17细胞及其分泌的细胞因子通过血脑屏障进入中枢神经系统，引起炎症细胞浸润、髓鞘脱失及轴索损害。这一过程涉及多条信号通路。Agrawal等发现，细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK1)敲除小鼠较野生型小鼠对EAE更易感，临床症状更严重[1]。在MS患者的脑组织及EAE小鼠的脊髓中检测到活化的核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)[2-3]。这些研究提示ERK-NF-κB信号通路在EAE的发生和发展中起重要作用。

本研究应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)免疫诱导雌性C57BL/6小鼠，建立EAE模型，待小鼠发病后给予甲基强的松龙(methylprednisol，MP)治疗，在体观察EAE小鼠的临床症状、脊髓病理及炎症介质变化，进一步探索其可能机制，为MP的临床使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1材料 8～10周龄雌性C57BL/6小鼠，购于上海斯莱克实验有限公司[许可证号SCXK(沪)2007-0005，合格证号200700506479]。鼠源MOG35-55多肽(MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)由上海生物工程有限公司合成，采用高效液相色谱仪纯化，HPLC纯度>98%；福氏完全佐剂(complete freund’s adjuvant，CFA)、百日咳毒素(pertussis toxin，PT)、罗克沙尔坚牢蓝染料(luxol fast blue，LFB)(美国Sigma公司)；灭活结核杆菌(mycobacterium tuberculosis H37Ra)(美国Difco公司)；MP(大连辉瑞制药公司)；一抗磷酸化ERK1/2，ERK1/2及磷酸化NF-κB，NF-κB(美国Cell Signaling公司)，T-bet和RoRγt(美国Abcam公司)。

1.2方法

1.2.1模型建立及动物分组 每只小鼠配制200 μL乳化剂(MOG35-55300 μg，结核杆菌500 μg)，于双侧胁部皮下分4点注射免疫小鼠，每侧2点，每点50 μL乳化液[4]。于……