李 娜, 李彦珺, 刘珍青, 许艳静

(青岛大学附属中心医院, 1. 皮肤科; 2. 消毒中心, 山东 青岛, 266042)

生殖器疱疹(GH)是性病门诊常见的性传播疾病(STD), 单纯疱疹病毒(HSV)为主要的感染病原体。GH患者可见生殖器脓疱、溃疡、水泡及结痂，部分患者也可无典型皮损样改变。研究[1]显示，临床性高危人群中HSV隐匿性感染高达21.6%。GH迁延难愈，易反复发作，在孕妇中还可引起垂直传播，造成死胎、流产、畸形等不良妊娠结局[2]。本研究回顾性分析2017年1月—2018年1月本院STD门诊300例疑似生殖器HSV感染患者的临床资料，探讨非典型皮损及无皮损HSV疑似感染者生殖道分泌物行核酸DNA检测的临床意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月—2018年1月本院STD门诊150例疑似HSV感染但无典型症状患者设为观察组，其中男89例，女61例，年龄18～38岁，平均(28.3±5.9)岁; 临床症状仅表现为尿道红肿、红斑、裂隙及宫颈糜烂或无任何临床表现。选取同期150例疑似HSV感染并有典型皮损支持患者为对照组，其中男84例，女66例，年龄21～43岁，平均(29.5±6.7)岁; 临床症状表现为水泡、结痂、脓疱、溃疡。2组患者均有婚外性史或配偶感染史，受检前1个月内无抗生素、抗病毒类药物及激素使用史。2组一般资料比较无显著差异(P>0.05), 具有可比性。本研究经本院伦理会批准通过，患者对本研究内容知情同意。

1.2 标本采集

详细了解患者的感染病史、性史，对于水泡、结痂、脓疱、溃疡患者，采用生理盐水擦拭病变处，于病变基底部用无菌棉拭子取渗出液、水泡液及痂皮送检; 对于非典型症状患者，男性用尿道拭子伸入尿道口2～4 cm, 旋转2周取脱落细胞，女性取无菌棉拭子于宫颈口旋转2周取脱落细胞送检。

1.3 实验室检查

HSVⅠ型及HSVⅡ型病毒采用荧光定量PCR检测，试剂及质控品使用武汉百泰基因有限公司荧光定量试剂盒。HSV-2引物序列: 5′-CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC-3′; HSV-1引物序列: 5′-CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC-3′。全自动基因扩增仪为Slan96P(上海)。① 标本预处理: 1 000 mL蒸馏水洗脱样本脱落细胞于Eppendorf管, 13 000 转/min离心去上清，沉淀加50 μL提取液振荡2 min混匀, 100 ℃煮沸10 min, 4 ℃下13 000 转/min离心5 min待检。② 扩增: 取2 μL上清作为扩增模板扩增，扩增条件: 95 ℃下2 min, 93 ℃下5 s, 55 ℃下45 s, 共40循环。结果判读严格遵循实际说明书，并设立阴性、阳性对照及质控品，保证结果的有效性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析, HSVⅠ型及HSVⅡ型感染率的比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

观察组检出HSV-Ⅱ型29例, HSVⅠ型1例, HSV检出率20.00%; 对照组HSV-Ⅱ型91例, HSV Ⅰ型5例, HSV检出率64.00%。2组检出率比较，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。疑似HSV感染患者中，男性HSV检出率34.10%, 女性检出率52.76%, 差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 非典型皮损与典型皮损疑似HSV感染患者检查情况比较[n(%)]

3 讨 论

近年来，中国GH年增长率高达70%, 尤其在部分沿海城市, GH的发病一直呈现上升趋势[3-5]。研究[6-9]显示，在性传播疾病中，GH的发病仅次于非淋性尿道炎及淋病[5]。大部分的生殖器疱疹均由HSV-Ⅱ型病毒感染所致, HSV病毒入侵生殖器皮肤黏膜后，可介导病毒包膜融合受感染细胞膜并释放胞浆病毒DNA, 在细胞核内合成子代病毒DNA, 潜伏感染及激活复发为HSV感染的重要特征[10-12]。HSV病毒为嗜神经性病毒，可侵犯中枢神经系统，并在骶神经节、迷走神经节等长期潜伏，神经节等组织不具活跃的新陈代谢易发生免疫逃逸[13], 在机体免疫力低下时潜伏病毒易造成病情的复发。研究[14]显示, GH在发作前后1周均有较高的传染性。

荧光定量PCR是具有较高灵敏性、特异性的分子生物学检测方法，相对于细胞培养、血清学试验、免疫荧光等传统方法，具有较强的优越性[15-17]。本研究结果显示, GH疑似患者典型皮损HSV检出率为64.00%, 非典型皮损为20.00%, 具有显著差异。HSV感染典型皮损多为集簇性水泡、糜烂，活动期病毒含量高、毒性强，非典型皮损部分呈裂隙、单个溃疡、红肿渗液性、硬结，但观察组HSV的检出率并不低, HSV病毒亚临床感染患者均存在间歇性病毒排放，临床称为“无症状排泌”、“亚临床排泌”[18-19]。部分无自觉症状患者易发生疾病漏诊，造成GH传播，高灵敏性检测方法如荧光定量PCR可减少这部分高危人群的漏诊。

国外研究[20-22]认为，所有生殖器溃疡和裂隙均应考虑生殖器疱疹的可能性，并行相应的HSV检测。HSVⅠ型病毒感染除一般性接触感染外，需关注非常规传播途径如口、生殖器接触传播等。在不同性别HSV检出率比较中，女性HSV检出率为52.76%, 男性为34.10%, 差异有统计学意义。研究[23]认为，女性的生理构造决定其HSV感染的风险性远高于男性，女性生殖系统的生理构造接触面更广，病毒的清除更难。

综上所述, HSV病毒具有潜伏感染及逃避先天免疫的特征，无症状感染在临床较为常见，对非典型皮损及无皮损的生殖道分泌物，单纯疱疹病毒DNA检测具有重要的应用价值。