大白杜鹃中萜类化学成分研究△

2018-12-01陈新涛吕光辉陈黎

中国现代中药 2018年11期

陈新涛，吕光辉，陈黎

(十堰市太和医院/湖北医药学院药学部，湖北十堰 442000)

大白杜鹃Rhododendrondecorum为杜鹃花科杜鹃花亚科杜鹃花属植物，产于四川西部至西南部、贵州西部、云南西北部和西藏东南部，生于海拔1000～3300 m的灌丛中或森林下，主产于中国四川、贵州、云南和西藏，缅甸东北部也有分布。该物种因花朵美丽，有栽培，具有较高的观赏价值。本实验标本采自四川宝兴，民间常用其根煎煮治疗跌打损伤[1]。杜鹃花属植物化学成分十分丰富[2-3]，但是文献对大白杜鹃萜类的研究较少，文献仅仅报道了少量的二萜类、黄酮类等化合物[4-7]，为了从天然产物中分离得到结构新颖的化合物，我们选取大白杜鹃进行了深入研究。从大白杜鹃的95%乙醇提取物中分离鉴定了8个化合物，其中包括6个二萜类化合物，2个降倍半萜类化合物，分别是grayanotoxin I(1)，grayanotoxin X(2)，grayanotoxin VIII(3)，rhododecorumin VII(4)，leucothol A(5)，grayanotoxin XXI(6)，(+)-Dehydrovomifoliol(7)，5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one(8)。

1 仪器与材料

1.1 仪器

核磁共振谱(Bruker AM-400)，半制备液相(Agilent 1100)，氘代试剂，J&K Chemical LTD、Cambridge Isotope Laboratories，Inc.半制备型色谱柱为YMC(5 μm，RP C18，250 mm×100 mm)，正相柱层析硅胶(100目、200～300目，青岛海洋化工)；高效液相色谱纯甲醇、分析纯甲醇、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、石油醚(上海国药集团化学试剂有限公司)；纯净水(杭州娃哈哈集团)。

1.2 材料

植物材料于2016年从四川宝兴海拔1400 m左右采摘，由湖北医药学院药学院叶方教授鉴定为杜鹃花属植物大白杜鹃Rhododendrondecorum.，植物样本现保存在湖北十堰市太和医院武当中药研究所标本室(No.20170725)。

2 提取和分离

干燥的大白杜鹃枝叶12 kg粉碎，在室温条件下反复用95%的乙醇冷浸提取4次，真空浓缩得总浸膏。然后将总浸膏用热水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，分别合并浓缩后得到石油醚部位180 g，乙酸乙酯部位102 g。将乙酸乙酯部位用大正相柱(CHCl3-MeOH，50∶1→1∶1)分成4个组分(A-D)。B组分用用ODS柱分成了5个子组分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子组分又经凝胶、正相以及半制备HPLC分离纯化得到化合物3(7.5 mg)、5(3.8 mg)、6(3.9 mg)。C组分用RP-C18柱分成了3个子组分(MeOH-H2O，30%→90%)。各子组分又经凝胶、正相以及半制备HPLC分离纯化得到化合物2(28.4 mg)、4(11.5 mg)、7(14.3 mg)。D组分反复用RP-C18柱，正相以及半制备HPLC分离纯化得到化合物1(8.6 mg)、化合物5(6.4 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：无色针晶；ESI-MSm/z：413.12[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：2.52(1H，dd，J=11.8，4.4 Hz，H-1)，2.11(1H，m，H-2α)，1.93(1H，m，H-2β)，3.51(1H，d，J=4.4 Hz，H-3)，3.52(1H，d，J=4.6 Hz，H-6)，1.91(1H，d，J=4.4 Hz，H-7β)，1.84(1H，br s，H-7α)，2.07(1H，br s，H-9)，1.66(1H，dd，J=13.5，6.0 Hz，H-11β)，1.51(1H，m，H-11α)，2.08(1H，overlap，H-12β)，1.53(1H，m，H-12α)，1.75(1H，m，H-13)，5.38(1H，s，H-14)，1.95(1H，s，H-15α)1.85(1H，s，H-15β)，1.26(3H，s，H-17)，0.91(13H，s，H-18)，1.12(3H，s，H-19)，1.29(3H，s，H-20)，2.04(3H，s，14-COCH3)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：51.2(C-1)，35.1(C-2)，83.5(C-3)，51.4(C-4)，84.6(C-5)，74.2(C-6)，43.4(C-7)，52.2(C-8)，55.5(C-9)，79.3(C-10)，22.6(C-11)，27.5(C-12)，59.5(C-13)，83.0(C-14)，60.2(C-15)，80.2(C-16)，23.5(C-17)，23.5(C-18)，19.1(C-19)，27.1(C-20)，172.3(14-COCH3)，21.3(14-COCH3)。以上数据与文献报道的grayanotoxin I数据一致[8]，化学结构见图1。

化合物2：无色针晶；ESI-MSm/z：377.05[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.98(3H，s，H-18)，1.15(3H，s，H-19)，1.82(1H，ddd，J=14.4，8.9，2.7 Hz，H-2a)，2.05(3H，s，14-COCH3)，2.36(1H，m，H-2b)，2.44(2H，m，H-15)，2.62(1H，m，H-13)，2.72(1H，t，J=6.7 Hz，H-9)，2.94(1H，t，J=9.4 Hz，H-1)，3.63(1H，dd，J=6.6，2.7 Hz，H-3)，3.70(1H，dd，J=10.5，2.2 Hz，H-6)，4.88(1H，s，H-17a)，4.92(1H，s，H-17b)，5.01(1H，s，H-20a)，5.08(1H，s，H-20b)，5.22(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，38.9(C-2)，82.5(C-3)，51.4(C-4)，84.2(C-5)，71.6(C-6)，40.1(C-7)，48.1(C-8)，54.6(C-9)，151.8(C-10)，26.3(C-11)，32.4(C-12)，49.2(C-13)，81.8(C-14)，50.5(C-15)，155.7(C-16)，106.8(C-17)，24.7(C-18)，19.4(C-19)，114.4(C-20)，172.9(14-COCH3)，21.2(14-COCH3)。以上数据与文献报道的grayanotoxin X数据一致[9]，化学结构见图1。

化合物3：无色针晶；ESI-MSm/z：335.15[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.04(3H，s，H-18)，1.18(3H，s，H-19)，1.72(1H，dd，J=14.3，2.3 Hz，H-7α)，1.83(1H，ddd，J=14.4，9.2，2.8 Hz，H-2β)，1.92(1H，dd，J=14.3，10.2 Hz，H-7β)，2.25(1H，d，J=16.5 Hz，H-15β)，2.34(1H，ddd，J=14.4，9.8，6.8 Hz，H-2α)，2.45(1H，dt，J=16.5，2.5 Hz，H-15α)，2.53(1H，d，J=5.1 Hz，H-13)，2.65(1H，t，J=6.8 Hz，H-9)，2.95(1H，t，J=9.5，H-1)，3.62(1H，dd，J=6.8，2.8 Hz，H-3)，4.00(1H，dd，J=10.2，2.3 Hz，H-6)，4.06(1H，s，H-14)，4.86(1H，s，H-17a)，4.93(1H，s，H-17b)，4.96(1H，s，H-20a)，5.04(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：45.4(C-1)，39.1(C-2)，82.6(C-3)，51.5(C-4)，84.0(C-5)，71.6(C-6)，40.0(C-7)，48.8(C-8)，55.1(C-9)，152.5(C-10)，26.1(C-11)，32.6(C-12)，51.2(C-13)，78.1(C-14)，50.1(C-15)，157.3(C-16)，106.5(C-17)，24.9(C-18)，19.4(C-19)，113.8(C-20)。以上数据与文献报道的grayanotoxin VIII数据一致[10]，化学结构见图1。

化合物4：无色针晶；ESI-MSm/z：351.20[M+H]+。1H-NMR(C6D5N，400 MHz)δ：3.46(1H，brd，H-1)，3.75(1H，d，J=2.6 Hz，H-2)，3.28(1H，d，J=2.9 Hz，H-3)，4.04(1H，dd，J=11.2，2.9 Hz，H-6)，1.99(1H，m，H-7a)，2.62(1H，t，J=12.2 Hz，H-7b)，2.44(1H，d，J=6.4 Hz，H-9)，1.97(1H，m，H-11a)，2.07(1H，m，H-11b)，1.85(1H，m，H-12a)，2.03(1H，m，H-12b)，1.95(1H，d，J=11.6 Hz，H-14a)，2.61(1H，d，J=9.8 Hz，H-14b)，1.90(1H，d，J=15.3 Hz，H-15a)，2.09(1H，d，J=14.2 Hz，H-15b)，1.45(3H，s，H-17)，1.30(3H，s，H-18)，1.58(3H，s，H-19)，5.30(1H，s，H-20a)，5.63(1H，s，H-20b)；13C-NMR(C6D5N，100 MHz)δ：49.8(C-1)，60.2(C-2)，65.6(C-3)，48.1(C-4)，80.7(C-5)，74.0(C-6)，49.0(C-7)，41.2(C-8)，49.1(C-9)，151.3(C-10)，32.2(C-11)，33.0(C-12)，81.1(C-13)，44.5(C-14)，59.1(C-15)，77.3(C-16)，21.7(C-17)，21.2(C-18)，21.1(C-19)，115.8(C-20)。以上数据与文献报道的Rhododecorumin VII数据一致[11]，化学结构见图1。

化合物5：无色粉末；ESI-MSm/z：319.08[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：1.12(3H，s，H-19)，1.19(3H，s，H-18)，1.36(3H，s，H-17)，3.97(1H，t，J=2.8 Hz，H-3)，4.84(1H，s，H-20a)，4.94(1H，s，H-20b)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：42.8(C-1)，31.4(C-2)，78.4(C-3)，49.7(C-4)，214.6(C-5)，48.2(C-6)，38.4(C-7)，46.0(C-8)，49.8(C-9)，151.7(C-10)，21.4(C-11)，24.6(C-12)，49.2(C-13)，36.1(C-14)，55.1(C-15)，80.2(C-16)，24.2(C-17)，25.4(C-18)，21.1(C-19)，105.6(C-20)。以上数据与文献报道的leucothol A数据一致[12]，化学结构见图1。

化合物6：白色无定形粉末；ESI-MSm/z：395.14[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：1.14(3H，s，H-19)，1.30(3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-17)，2.01(3H，s，H-20)，2.06(3H，s，14-COCH3)，3.87(1H，dd，J=6.9，2.9 Hz，H-3)，4.07(1H，dd，J=4.8，2.0 Hz，H-6)，5.47(1H，s，H-14)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：127.1(C-1)，33.5(C-2)，79.5(C-3)，51.8(C-4)，215.6(C-5)，70.3(C-6)，42.5(C-7)，55.1(C-8)，59.2(C-9)，143.2(C-10)，23.4(C-11)，28.3(C-12)，54.2(C-13)，82.0(C-14)，57.9(C-15)，80.2(C-16)，24.5(C-17)，23.9(C-18)，22.1(C-19)，16.7(C-20)，172.8(14-COCH3)，21.6(14-COCH3)。以上数据与文献报道的grayanotoxin XXI数据一致[13]，化学结构见图1。

化合物7：白色无定形粉末；ESI-MSm/z：223.20[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.99(3H，s，H-11)，1.08(3H，s，H-12)，1.86(3H，d，J=1.3 Hz，H-13)，2.28(3H，s，H-10)，2.50(1H，d，J=17.3 Hz，H-2a)，2.33(1H，d，J=17.3 Hz，H-2b)，5.93(1H，s，H-4)，6.45(1H，d，J=15.7 Hz，H-8)，6.81(1H，d，J=15.7 Hz，H-7)；13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：41.8(C-1)，49.7(C-2)，197.4(C-3)，127.6(C-4)，160.8(C-5)，79.5(C-6)，145.5(C-7)，130.5(C-8)，197.8(C-9)，28.6(C-10)，24.5(C-11)，23.1(C-12)，18.7(C-13)。以上数据与文献报道的(+)-Dehydrovomifoliol数据一致[14]，化学结构见图1。

化合物8：白色无定形粉末；ESI-MSm/z：225.09[M+H]+。1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.96(3H，s，H-12)，1.18(3H，s，H-13)，1.19(3H，s，H-11)，1.58(1H，ddd，J=12.8，3.3，1.8 Hz，H-2a)，1.66(1H，dd，J=14.3，9.1 Hz，H-4a)，1.82(1H，d，J=12.8 Hz，H-2b)，2.28(3H，s，H-10)，2.30(1H，ddd，J=14.3，5.0，1.8 Hz，H-4b)，3.76(1H，m，H-3)，6.18(1H，d，J=15.8 Hz，H-8)，7.16(1H，d，J=15.8 Hz，H-7)；13C-NMR(CD3OD，100 MHz)δ：36.4(C-1)，47.8(C-2)，64.7(C-3)，41.5(C-4)，69.3(C-5)，71.0(C-6)，145.6(C-7)，133.7(C-8)，200.4(C-9)，27.6(C-10)，29.9(C-11)，25.3(C-12)，20.2(C-13)。以上数据与文献报道的5α，6α-Epoxy-3β-hydroxy-megastigm-7-en-9-one数据一致[15]，化学结构见图1。