刘 婵 冯 娟 谢云丹 胡万涛 王江勇 苏友禄



基于毒力基因的罗非鱼无乳链球菌三重PCR检测方法的建立及应用*

刘 婵1,2冯 娟2谢云丹1,2胡万涛3王江勇2苏友禄2①

(1. 天津农学院水产学院 天津 300384；2. 中国水产科学研究院南海水产研究所 农业农村部南海渔业资源开发利用重点实验室 广州 510300；3. 广州大学生命科学学院 广州 510006)

无乳链球菌()作为罗非鱼主要病原，传染力强、致死率高，部分鱼从发病到死亡无明显病症，难以确定鱼体是否携带该病原菌，建立适用于生产一线的无乳链球菌检测技术势在必行。根据GenBank中无乳链球菌透明质酸酶基因()、青霉素结合蛋白基因()和CAMP因子基因()的保守序列，设计3对特异性引物，对多重PCR的反应条件和体系进行优化，建立基于毒力基因的罗非鱼无乳链球菌三重PCR检测方法，并运用该方法检测来自广东省不同地区的罗非鱼组织样品。构建的三重PCR检测方法仅在无乳链球菌中扩增出3条特异性条带，而在罗非鱼和常见的水产病原菌菌株中均未扩增出任何条带，表现出良好的特异性；以无乳链球菌基因组DNA浓度7.24×10–5~5.65 ng/μl为模板进行扩增，该三重PCR能检测到的最低模板浓度为1.81×10–3ng/μl，表现出较高的灵敏度；运用该方法检测188个罗非鱼组织样品，其阳性检出率与常规细菌分离鉴定阳性率一致，以常规细菌分离鉴定为标准，对该三重PCR检测方法进行评价，其诊断敏感性(Dse)和诊断特异性(Dsp)均为100%。结果表明，构建的三重PCR检测方法不仅显著提高了检测的准确度和灵敏度，还可在同一反应中同时检测3种无乳链球菌毒力基因，为无公害水产品中无乳链球菌的快速检疫、水产养殖病害早期预警提供了一种快速、精准和高效的检测技术。……