张代娟, 刘江月, 王建英

(潍坊医学院病理生理教研室， 山东 潍坊 261053)

3,4-二羟基苯乙酮(3,4-dihydroxyacetophenone, 3,4-DHAP)是从具有活血化瘀作用的中药——秃毛冬青叶中提取的单体成分，在临床上被试用于治疗冠心病、妊娠高血压综合征和慢性阻塞性肺病等疾病，有较好的疗效；在实验水平发现3,4-DHAP具有抑制血小板聚集和抑制血栓形成等作用；另外，我们发现其还具有抗炎作用[1-2]。众所周知，动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)是许多心脑血管疾病的基本病理过程，其发病机制涉及炎症反应和脂质代谢异常等多方面。我们发现3,4-DHAP在AS斑块炎症反应中有较好的抗炎效果，同时也观察到其具有降脂作用：如在ApoE-/-小鼠AS模型中，3,4-DHAP可降低小鼠血浆总胆固醇(total cholesterol, TC)和甘油三酯(triglyceride, TG)[3]；在新西兰大白兔AS模型中，3,4-DHAP可降低血浆TC、TG及低密度脂蛋白胆固醇，亦可降低兔肝脏的TC和TG水平[2]。3,4-DHAP通过什么途径改善肝脏脂质代谢呢？我们拟从脂质代谢的调节途径之一——AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)途径入手，揭示3,4-DHAP的降脂作用机制，为其临床推广提供实验数据。

材 料 和 方 法

1 动物

雄性新西兰大白兔，由潍坊医学院实验动物中心提供，9周龄，清洁级，体重(2.5±0.2) kg。

2 主要试剂

3,4-DHAP购自TCI；辛伐他汀粉剂购自Sigma；抗AMPK抗体、抗磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK, p-AMPK)(Thr172)抗体、抗磷酸化固醇调节元件结合蛋白1c(phosphorylated sterol regulatory element binding protein 1c, p-SREBP-1c)(Ser372)抗体、抗磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(phosphorylated acetyl-CoA carboxylase, p-ACC)(Ser79)抗体、qPCR试剂盒和TG试剂盒购自Sigma。

3 主要方法

3.1细胞培养、分组及处理 L02细胞由潍坊医学院段誉副教授赠送，常规传代培养，置于37 ℃、 5%二氧化碳培养箱中培养。细胞分组：正常对照(control)组、模型(model)组、3,4-DHAP组和辛伐他汀组。模型复制方法：将细胞接种在培养瓶或培养板中，当细胞生长到80%密度时，换成无血清培养液继续培养大约12 h，再用0.1 mmol/L油酸(oleic acid, OA)孵育24 h。……