毛彦稳， 张小欢， 彭 伟， 刘慧铭， 刘玲伶, 王圆圆， 刘丽荣， 张莹莹， 张 帆， 石明隽， 肖 瑛， 汤 磊， 郭 兵△

(贵州医科大学 1病理生理学教研室， 2重大疾病发病机制及药物防治特色重点实验室， 贵州 贵阳 550025； 3贵州医科大学附属医院检验科， 4贵州医科大学药学院， 贵州 贵阳 550004)

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)的发生发展进程中，转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)可通过激活 Smads 信号通路诱导肾小管上皮细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)并促进肾间质细胞外基质(extracel lular matrixc，ECM)的合成，进而造成广泛的肾组织纤维化[1-3]。Smad7作为抑制性Smad蛋白，可以抑制 TGF-1/Smads信号通路介导的生物学效应。本课题组在DN的纤维化进程中发现，Smad7蛋白表达显著下调，且伴有miR-21表达上调及TGF-β1/Smads 信号通路过度激活[4]。有研究发现，TGF-β1可以通过上调miR-21表达而下调Smad7蛋白水平，进而促进纤维化的发生发展[5]。

α-硫辛酸(alpha-lipoic acid，ALA)是一种含硫的抗氧化剂，可以清除活性氧簇，对氧化应激引起的组织损伤有治疗作用。而氧化应激也是DN的重要的发病因素之一，因此本研究通过观察抗氧化剂ALA对糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠肾脏纤维化病变的影响，以miR-21和Smad7为靶点，探讨其可能的作用机制。

材 料 和 方 法

1 材料

1.1实验动物 健康清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠，体重(180±20) g，共24只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，批号为SCXK(京) 2009-0004。

1.2主要试剂 ALA(奥立宝公司)；链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)及抗collagen I和collagen III单克隆抗体(Sigma)；抗Smad7和TGF-β1多克隆抗体(Santa Cruz)；抗β-actin抗体(Promed)；miR-21转录和real-time PCR试剂(广州锐博生物公司)；I 抗稀释液、ECL显色剂和BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物研究所)；Western blot用PVDF膜和3 mm Whatman滤纸(Millipore)。

1.3主要仪器 稳步倍加型血糖仪(强生公司)；……