广东省肇庆市广宁县疾病预防控制中心（526300）朱素芬

大肠埃希菌是常见的条件致病菌，当出现肠屏障功能受损、抵抗能力受损时，容易出现菌群移位，引起机会感染，常引起切口感染、肠道感染、泌尿系统感染等疾病[1][2][3]。平皿培养法是进行细菌鉴定的“金标准”，但该方法耗费时间长，无法进行快速检测，特别是在户外，无法推广[4]。测试片检测技术操作简单、速度快，在食品安全和食源性细菌性食物中毒污染指示中的应用前景越来越广阔。

1 材料与方法

1.1 实验菌株及样品来源 大肠菌群测试片，3M有限公司生产，大肠埃希氏菌标准株（ATCC25922）为中国普通微生物菌种保存中心提供，部分大肠埃希氏菌菌株为本实验室分离和保存。以2016年1月～2017年5月，疾病控制中心获得怀疑为细菌感染食源性疾病的对象食物与食具表面样品174份，其中食物110例、食具64例。

1.2 方法

1.2.1 大肠艾希氏测试菌片法最低检出限试验 刮取大肠埃希氏菌标准株（ATCC25922）新鲜过夜培养的纯菌苔，在生理盐水中制备0.5麦氏单位的菌悬液，并10倍梯度稀释至10-8稀释度，分别取10-6、10-7、10-8的稀释度菌悬液各1ml，分别采用平皿计数以及测试片法进行试验，判断最低检出限。

1.2.2 实际样本处理 对于怀疑为细菌性食物中毒疫情，参照食物中毒诊断标准及技术处理总则中《食品安全事故流行病学调查技术指南》（2012年版）（以下简称《指南》）推荐的样品采集方法[5]，无菌操作采集食品和食具涂抹拭子，2℃～8℃条件下2h内送至实验室进行预处理，用PBS缓冲液处理制备成为悬液，-80℃冰箱保存。

1.2.3 大肠艾希氏测试菌片法在实际样本中的应用 25g样品放入225ml生理盐水中制备1：10样品稀释液，取10-2、10-3稀释液接种2个平皿，浇注VRBA琼脂，36℃培养18-24后计数。挑取10个不同类型的菌落移植BGLB肉汤，36℃培养48h，排除阳性杆菌，计算样本大肠菌群数。同步将10-2、10-3稀释液接种到测试片上，每个稀释度做两个平行，36℃培养24h，计算平行测试片菌落数，取均值，将菌落接种到营养琼脂平板，革兰染色镜检，送全自动分析系统鉴定。

1.3 统计学处理 采用SPSS20.0软件进行统计学计算，最低检出限服从正态分布的采用（Mena±SD）符号（±s）表示，组间比较采用t检验，敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、符合率采用百分比表示，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 大肠艾希氏测试菌片法 测试片法10-6、10-7稀释度条件下的最低检出限低于平皿计数法，差异有统计学意义（P＜0.05）。见附表。

2.2 大肠艾希氏测试菌片法在实际样本中的应用结果 在174份细菌性食物中毒采集的样本中，采用平板计数法检出大肠菌群阳性的有103份，结果阴性的有71例。而大肠艾希氏测试菌片法对实际样本应用的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、符合率分别为99.03%（102/103）、92.96%（66/71）、95.32%（102/107）、98.51%（66/67）、96.55%（168/174）。

附表 平皿计数法、测试片法不同稀释度条件下最低检出限对比[(±s),cfu/m]

附表 平皿计数法、测试片法不同稀释度条件下最低检出限对比[(±s),cfu/m]

注：与平皿计数法相比，*P＜0.05。

方法 10-6 10-7 10-8平皿计数法 45.0±3.4 11.0±2.2 1.0±0.7测试片法 42.4±2.6* 9.5±1.5* 1.0±0.5

3 讨论

测试片法特异性强，试剂对其他细菌的抑制效果较好，不显色，对大肠菌群的下限可达到1cfu/ml，即使是无菌体液，也可能会检出阳性，可能与实验室污染、未感染的样本[6]。从检出的效率来看，测试片法敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、符合率分别为99.03%、92.96%、95.32%、98.51%、96.55%，均在92%以上，达到较高水平，误漏诊主要与标本处理不合格、菌液浓度差异有关有关。测试片法当前不仅仅用于粪便污染指示重要工具，还可进行菌群失调状态分析，从而判断肠道生态环境。一般而言，肠道菌群紊乱与感染、肠黏膜屏障功能障碍、抗生素应用等因素有关。测试片不仅速度快，还能够省去培养基、杀菌消毒等繁琐的工作，这对于工作任务比较重的实验室而言，具有重要意义，可提高样品检验工作效率，缩短检验前的停留时间，缩短诊断的流程，为疫情处置和临床治疗提供的及时病原学依据[7][8]。

测试片法可以避免平皿培养过程中污染所致检验差错，在细菌感染中的诊断价值较高，提高抗生素合理应用水平。当然，需注意的是，不同厂商制造的测试片其质量可能存在一定的差异，从而影响检验的精度、效率，实验室自身还需要做好测试片的保存管理。

测试片法在细菌检测中的检出限度更低，同时诊断效率与平板计数法相近，适合食源性疾病病原菌的分析。