黔南州食品药品检验所，贵州 都匀 558000

淫羊藿根为小檗科植物箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb. Et Zucc.) Maxim、巫山淫羊藿EpimediumwushaneneseT.S.Ying、天平山淫羊藿EpimediummyrianthumSteam、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim、毡毛淫羊藿EpimediumcoactumH.R.Liang et W.M.Yan、粗毛淫羊藿EpimediumacuminatumFranch及光叶淫羊藿Epimediumsagittatumvar. glabratum T.S.Ying的干燥根。具有补肾壮阳、祛风除湿的功效，用于肾虚阳痿、小便淋漓、咳喘、风湿痹痛[1]。淫羊藿含有多种有效成分，其主要有效成分为淫羊藿苷类黄酮化合物[2]，而其中的朝藿定C具有抗骨质疏松、抗癌、免疫增加等广泛的药理活性[3-4]。课题前期进行的预实验结果显示，朝藿定C的含量远高于淫羊藿苷等其他类黄酮化合物，适宜定量分析。故选择朝藿定C作为定量指标用于淫羊藿根药材的质量控制。本文用反相液相色谱测定了11种贵州地产药材淫羊藿根中朝藿定C的含量，可为淫羊藿根质量控制及相关医药产业提供理论根据参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器 美国安捷伦1260高效液相色谱仪，上海科导SK250LHC超声波清洗器，瑞士梅特勒托利多AG135和AL204电子天平，北京普析TU-1901紫外分光光度计。

1.2 材料 朝藿定C对照品(含量95.5%，批号：111780-201503，中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱纯，批号：20170403，天津科密欧)；95%乙醇(分析纯，批号：20161105，天津科密欧)；纯净水(批号：20171201，娃哈哈)；淫羊藿根样品分别采集自贵州各地共11批(采集信息见表1)，样品均经贵阳中医学院何顺志教授鉴定。样品洗净后晒干，粉碎，过三号筛，即得供试样品，置于干燥器中保存。

表1 淫羊藿根样品采集信息

2 方法与结果

2.1 色谱条件[5-6]色谱柱：美国安捷伦Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(25∶75)；流速：1.0 mL/min，进样量：10 μL；柱温：30℃；检测波长270 nm。理论板数以朝藿定C峰计算均不低于6000。

2.2 对照品溶液配制 精密称取朝藿定C对照品50.94 mg置50 mL量瓶中，加50%乙醇超声溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液5 mL置20 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，即得(0.243 mg/mL)。

2.3 供试品溶液配制[5-6]取供试样品约0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇20 mL，称定重量，放置过夜，超声60分钟(50 kHz)，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 峰纯度考察 取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件，依法测定。朝藿定C峰的紫外扫描光谱表明：朝藿定C对照品的紫外扫描图在200 nm、270 nm和320 nm处有最大吸收。3D图谱显示：200 nm波长处吸收大但杂质干扰较多，320 nm波长处干扰少但吸收较小，270 nm波长处吸收值较大且干扰少。供试品溶液中朝藿定C峰的紫外扫描图与对照品峰的紫外扫描图谱一致，且纯度因子达到999以上。综合以上考察，确定检测波长为270 nm。

2.5 线性关系考察 精密量取2.2项下对照品贮备液1、2、4、6、8 mL分别置10 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，得一系列浓度级别的对照品溶液；精密吸取上述系列对照品溶液和对照品贮备液各10 μL，分别注入液相色谱仪，按2.1项下的色谱条件测定，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度(mg/mL)为横坐标，进行线性回归计算，朝藿定C回归方程为：y=18219.1343x+26.8045，r=1.0000，结果表明朝藿定C在0.0973 ～0.9730 mg范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度考察 精密吸取2.2项下朝藿定C对照品溶液10 μL，按2.1项下的色谱条件，注入液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积，朝藿定C峰面积的RSD为0.14%，结果表明方法有良好的精密度。

2.7 稳定性考察 取同一供试品溶液分别于0、5、11、18 h进样，进样量10 μL，按2.1项下的色谱条件，测定朝藿定C峰面积，RSD为0.6%，表明供试品溶液在18 h内稳定性良好。

2.8 重复性考察 称取同一供试品6份，按2.3项下方法配制供试品溶液，按2.1项下的色谱条件，进样量10 μL，测定峰面积，计算含量。供试品中朝藿定C的平均含量为2.611%，RSD为0.4%，表明本方法重复性良好，符合定量标准要求。

2.9 加样回收率试验 精密称取8份已测定含量的样品0.1 g(朝藿定C含量为2.611%)，分别置具塞锥形瓶中，精密加入回收对照溶液20 mL，称定重量，放置过夜，超声60 min，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，按2.1项下的色谱条件，进样10 μL，记录色谱图，计算回收率。朝藿定C的平均回收率为102.3%，RSD为0.7%，表明本方法准确度良好，符合相关规定。结果见表2。

2.10 样品含量测定 取不同产地供试样品按2.3配制供试品溶液，分别进样10 μL，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量。结果见表3。

表2 淫羊藿根中朝藿定C的回收率实验结果

表3 淫羊藿根中朝藿定C含量测定结果 (%)

3 讨论

为获得准确的含量测定结果，本研究考察了浸泡过夜、浸泡过夜后超声、浸泡过夜后水浴回流、浸泡过夜后超声再水浴回流等四种不同的提取方法，结果表明，浸泡过夜后超声效果为最佳，增加水浴回流步骤反而使朝藿定C含量结果降低。文献报道[7]，朝藿定C(三糖苷)在高温环境下会脱去一个鼠李糖后转化为淫羊藿苷(二糖苷)，导致朝藿定C含量下降、淫羊藿苷含量升高。因此选择浸泡过夜后超声作为本实验的提取方式。

实验中有3个样本分别为黔岭淫羊藿和水城淫羊藿，不在贵州省淫羊藿根药材标准收载的品种中，但作为贵州特有品种，本研究也对这3个样本进行了含量测定，朝藿定C含量最低为0.86%，而标准收载的品种中，朝藿定C含量最低为0.89%。结果显示，非标准品种中朝藿定C的含量也可以达到标准品种的含量水平，建议修订淫羊藿根标准时增加收载品种，扩大贵州省淫羊藿根来源的覆盖范围。 淫羊藿根作为贵州省少数民族常用药材，收载于《贵州省中药材民族药材质量标准》中，但标准中仅有一项性状描述，不能有效控制药材的质量。已有文献研究对象多为淫羊藿药材，按《中国药典》一部定义为淫羊藿的干燥叶[8]。淫羊藿植株入药部位不同，有效成份含量也有所差异，本研究可为淫羊藿根药材的标准制定、医疗应用和质量控制提供数据参考。