王辉俊 柯樱 叶冠

摘 要 目的：建立瓜蒌皮注射液中腺苷和唾液酸的HPLC-MS/MS定量分析方法。方法：采用Waters Xbridge C18色谱柱（4.6 mm×50 mm，3.5 mm），流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱。质谱条件为电喷雾离子源（ESI），负离子模式监测，源喷射电压：-4.500 kV；雾化温度：550 ℃，采用多反应监测模式（MRM）对瓜蒌皮注射液中腺苷和唾液酸进行定量分析。结果：腺苷和唾液酸线性关系均良好（R≥0.995），线性范围均为250～32 000 nmol/L，腺苷和唾液酸的检出限分别为31.25 nmol/L和3.91 nmol/L。应用建立的HPLC-MS/MS方法测定了3批瓜蒌皮注射液中腺苷和唾液酸的含量，分别为1.407～1.465 mmol/L和251.0～678.7 nmol/L。结论：该方法灵敏性、专属性和选择性好，可用于瓜蒌皮注射液中腺苷和唾液酸的定量测定和质量控制。

关键词 瓜蒌皮注射液 HPLC-MS/MS 腺苷 唾液酸

中图分类号：TQ460.72； R286 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2018）17-0072-04

Determination of the contents of adenosine and N-acetylneuraminic acid in Gualoupi injection by HPLC-MS/MS*

WANG Huijun**， KE Ying， YE Guan***

（Shanghai Pharmaceuticals Holding Co.， Ltd.， Shanghai， 201203， China）

ABSTRACT Objective： To establish an HPLC-MS/MS method for the determination of adenosine and N-acetylneuraminic acid （NANA） in Gualoupi injection. Method： HPLC analysis was performed on a column of Waters Xbridge C18 （4.6 mm×50 mm， 3.5 mm） with linear gradient elution of methanol-0.1% formic acid solution. Mass spectrometry analysis was carried out at ion spray voltage of ？4.500 kV and the turbo spray temperature of 550 ℃ with electrospray ionization （ESI） ion source in negative mode. The contents of adenosine and NANA in Gualoupi injection were quantitatively determined by multiple reaction monitoring （MRM）. Results： The standard curves of both adenosine and NANA showed good linearity （R≥0.995） over the range of 250-32 000 nmol/L and their detective limits were 31.25 nmol/L and 3.91 nmol/L. The contents of adenosine and NANA determined by HPLC-MS/MS in three batches of Gualoupi injections were 1.407-1.465 mmol/L and 251.0-678.7 nmol/L， respectively. Conclusion： This method possesses good sensitivity， specification and selectivity and can be used for the determination and quality control of adenosine and NANA in Gualoupi injection.

KEy WORDS Gualoupi injection； HPLC-MS/MS； adenosine； N-acetylneuraminic acid

瓜蔞皮注射液为上药集团子公司上海第一生化药业有限公司独家产品，是以瓜蒌皮为原料，经水提醇沉，再经过离子交换树脂洗脱而制成的灭菌水溶液，收载于国家中成药标准汇编内科-心系分册438页（WS-11417（ZD-1417）-2002-2008）。临床上用于冠心病、稳定性心绞痛的治疗，具有行气除满、开胸除痹之功效[1-5]。瓜蒌皮注射液临床应用广泛，但目前仅测定与功能主治无关的精氨酸作为含量测定标准。我们前期已做了大量瓜蒌皮注射液物质基础的工作，鉴定出7个氨基酸、4个核苷酸、5个黄酮、1个多肽、1个唾液酸、1个含氮化合物和2个低分子量聚糖[6-8]，其中腺苷具有治疗室上心肌过速，动脉粥样硬化，急性心肌梗死、心肌保护和突发性耳聋等作用[9-12]。有报道证明唾液酸（N-乙酰神经氨酸，简称NANA）能够降低血液高凝血状态，从而预防和阻止凝血相关的心血管疾病发生[13]。……