李林英，刘 琳，邓昭敏，向省平，高学梅

(西藏自治区人民政府驻成都办事处医院检验科,成都 610041)

生化检测是临床诊断工作的重要辅助手段，通过对血液或体液的分析，检测相关生化指标，再结合其他临床资料进行综合分析，可诊断或预测疾病，评价器官功能，鉴别并发因素，决定治疗的基准，并评价治疗的预后。目前生化检验主要使用全自动生化分析仪，全自动生化分析仪指所有分析过程都实施了自动化的生化分析仪[1]。国际标准化组织对医学实验室的能力认证提出了《医学实验室——质量和能力的要求(ISO15189)》，根据该要求，任何检验体系的建立和变更都需得到确认。ISO15189体系在实验室对检测方法的确认和验证方面提出了很多具体的要求，围绕全自动生化仪检测系统，包括精密度、线性、临床可报告范围、正确度、参考区间、抗干扰等试验。王治国[2]认为干扰试验的目的是评估被分析标本中其他物质引起的系统误差，这些误差是恒定的，对检测的影响与被测物质浓度无关，仅与标本的干扰物浓度有关。多年来的临床研究表明，溶血、脂血、黄疸是临床生化检验标本干扰的主要来源，会对部分项目产生规律性的干扰。本研究应用国内生化试剂研究日立7180生化分析仪的抗干扰性能，提供医学实验室判断生化结果时，排除干扰的有效依据，并为ISO 15189体系认证作准备。

1 材料与方法

1.1仪器与试剂 (1)仪器：日立HITACHI 7180全自动生化仪。(2)试剂：肝功能检测项目包括血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)。肾功能包括血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)。心肌酶类包括血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)(以上检测试剂盒为宁波美康生物科技股份有限公司生产的试剂盒)。血脂包括血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(以上为北京九强生物技术股份有限公司生产的试剂盒)。方法学：见表1。校准品：生化试剂厂家配套校准品。

1.2方法

1.2.1标本 制备新鲜混合血清，取当日体检正常标本20例，要求标本无溶血、脂血、黄疸，吸取上层血清，混合均匀。

1.2.2干扰物 溶血：取检测过血红蛋白的全血标本，记录血红蛋白浓度，加纯化水进行溶血处理(反复吸打后静置0.5 h)，配制成血红蛋白浓度为60 g/L的溶血干扰物原液，并依次稀释至10、20、40 g/L。脂血：取甘油三月桂酸酯纯品，加入热的曲拉通中，继续加热至溶解，加水搅拌，配制成甘油三月桂酸酯浓度为120 mmol/L的脂血干扰物原液，并依次稀释至20、40、80 mmol/L。黄疸：取胆红素纯品，加入纯化水中，再加NaOH溶液并搅拌直至胆红素溶解溶液澄清，使用稀盐酸调节pH至约为7.2，配制成胆红素浓度为6 000 μmol/L的黄疸干扰物原液，并依次稀释至1 000、2 000、4 000 μmol/L。

1.2.3干扰试验 取1.2.1所述标本，分出13支，分别以干扰物∶血清=1∶9的比例加入干扰物，获得溶血系列干扰物浓度为1、2、4、6 g/L，并用比色法测定血红蛋白，结合混合血清的原始血红蛋白浓度计算干扰物加入的浓度，确保干扰物浓度偏差在10%以内。脂血系列干扰物浓度为2、4、8、12 mmol/L，并用生化仪检测TG浓度，结合混合血清原始TG浓度计算干扰物加入的浓度，确保干扰物浓度偏差在10%以内。黄疸系列干扰物浓度为100、200、400、600 μmol/L，并用生化仪检测总胆红素浓度，结合混合血清原始总胆红素浓度计算干扰物加入的浓度，确保干扰物浓度偏差在10%以内。最后1支作为基准组，加入等量的生理盐水。上机测试各项目，并做3个重复测试。

1.2.4结果判断 根据国家卫计委《临床检验中心室间质量评价标准(2017年版)》的各项目可允许范围，干扰物浓度达到某一浓度时，检测结果与对照结果偏差超过可允许范围，则认为该项目仅能承受其前1个浓度的干扰物。

1.3统计学处理 检测结果录入Excel表格进行统计，计算每个干扰物水平3次重复的平均值，并与基准组进行比较，计算偏倚，统计各干扰物偏差方向的规律。

2 结 果

2.1各项目方法学和各干扰物最高浓度值结果的平均浓度 见表1。

2.2溶血试验结果 心肌酶3个项目CK、CK-MB、LDH溶血干扰在1 g/L时，对结果的影响不可接受(分别为23.2%、16.9%、26.9%的正偏差)；AST、TB、DB、UA、TG能承受的溶血干扰在4 g/L；其余项目ALT、ALP、GGT、TP、ALB、CRE、BUN、GLU、TC、HDL-C、LDL-C能承受试验设定的最大溶血干扰物浓度6 g/L。心肌酶受溶血干扰结果大幅上升；ALT、AST、TP、ALB、BUN、TC、TG受溶血干扰结果轻度上升，偏差在干扰物4 g/L时分别为5.7%、11.4%、3.2%、2.8%、4.2%、6.7%、10.8%；TB、DB、CRE、UA受溶血干扰结果轻度下降，偏差在干扰物4 g/L时分别为10.2%、12.8%、3.2%、7.1%；ALP、GGT、GLU、HDL-C、LDL-C结果几乎不受溶血影响。

2.3脂血试验结果 ALT、AST、TP、TB、DB、CK、CK-MB能承受的脂血干扰在8 mmol/L；其余项目ALB、ALP、GGT、CRE、BUN、UA、GLU、LDH-C能承受试验设定的最大脂血干扰物浓度为12 mmol/L；血脂4项由于本身依附于脂类存在，不作该项评价。TP、ALP、GGT、CRE、UA、CK、CK-MB、LDH-C受脂血干扰轻度上升，偏差在干扰物8 mmol/L时分别为4.8%、8.5%、10.5%、8.4%、7.6%、10.1%、12.5%、6.7%；ALT、AST、TB、DB受脂血干扰轻度下降，偏差在干扰物8 mmol/L时分别为13.2%、12.8%、11.7%、11.2%；ALB、BUN、GLU结果几乎不受脂血影响。

2.4黄疸试验结果 CK-MB、TC、TG能承受的黄疸干扰在400 μmol/L；其余项目ALT、AST、ALB、TP、ALP、GGT、CRE、BUN、UA、GLU、CK、LDH、HDL-C、LDL-C能承受试验设定的最大黄疸干扰物浓度为600 μmol/L；TB、DB由于本身依附于胆红素存在，不作该项评价。ALT、AST、TP、ALP、GGT、CRE、UA、CK-MB、TC、TG受黄疸干扰轻度下降，偏差在干扰物400 μmol/L时分别为8.5%、3.3%、2.3%、3.4%、9.7%、5.7%、7.3%、14.7%、7.4%、7.1%；ALB、BUN、GLU、CK、LDH、HDL-C、LDL-C结果几乎不受黄疸影响。

表1 各项目方法学和各干扰物最高浓度时的结果平均水平

注：―表示无数据

3 讨 论

随着科学的迅猛发展，在满足更高的医学应用需求的同时，各种医学辅助手段也越来越趋向严谨和完善。近年来对ISO15189体系认证中生化检测系统性能验证和标本抗干扰方面的研究较多，其中以金鹤成[3]的HITACHI7060系统抗干扰性能评价最早(2001年)，评价了TG和UA 2项，由于系统过时，对目前医学检验研究已鲜有参考价值。生化分析仪和配套试剂供应商种类繁多，需进行配套性能的评价，近年来科学工作中，李强[4]在AU680的抗干扰研究比较系统和完备；张静静等[5]对BS480的精密度、准确度、抗干扰等性能进行了评价；刘沛[6]深度评价了CK-MB试剂的抗干扰性能，对本研究工作颇有借鉴意义。

本研究溶血干扰的心肌酶类项目显著升高，是由于血细胞含有高浓度的心肌酶类物质，对心肌酶类项目产生不可逆的正向干扰[7]。溶血标本呈现的暗红色对500nm附近光波的吸收能解释单试剂TC、TG的升高问题，其他影响较小的项目则可能是由于细胞内蛋白类、脂类、部分其他酶类则仅比血清稍高。溶血标本去除干扰极其困难，一般采取重新采血的办法。刘磊[8]认为对易发生溶血的标本，应尽量不用留置针连接采血器采血，使用单纯采血器能降低溶血的发生率。脂血标本的血清中存在较高浓度的乳糜颗粒，呈现浅黄色或乳白色，而标本出现脂血原因可能为患者输注脂肪乳但未达到规定的代谢时间即采血，患者采血前非空腹状态或已进食高脂肪食物，患者自身已有高脂血症等，理论上会使所有波长的吸光度上升[9]。随生化检测系统的完善，双试剂能去除标本空白，副波能消除副产物和杂质的干扰，因此脂血在各项目的干扰程度一般。ALT、AST、TB、DB受脂血影响下降可能是由于乳糜颗粒过多吸入反应体系，使参与反应的血清含量减少。去除脂血干扰的方法一般有稀释法、高速离心法、乙醚提取法等。周垚等[10]认为高速离心法效果较好，且操作便捷，适合临床应用。黄疸标本的干扰原理主要是胆红素的强还原性，影响试剂中的氧化性底物和中产物的工作，如竞争Trinder反应中的过氧化物，使反应产物减少(如TC、TG、UA)。其次，棕黄色的胆红素会对通过血清的450nm附近的光波形成特殊吸收，随光解或被氧化而生成胆绿素，胆绿素在波长550nm有特殊吸收，从而影响相应波长附近的反应结果。另外，患胆汁淤积性黄疸的婴儿，由于脂蛋白-X的存在，致使LDL-C和双缩脲法TP的结果异常偏高，因此黄疸影响下的生化检测结果，还应考虑临床的一些其他生理、病理因素[11]。张厚毅等[12]认为利用胆红素的半抗原性质，使用聚苯乙烯颗粒包被的抗胆红素抗体与严重黄疸的血清标本作用，再离心去除聚苯乙烯颗粒，能获得良好的去黄疸干扰效果，目前该方法尚未被推广使用。试验结果在临床应用中有重要意义，如渠建军[13]对高脂血症患者的血清TB浓度进行统计研究，发现血清TB与脂血浓度呈负相关。本研究试验表明，化学氧化法TB、DB对于脂血的抗干扰能力一般，随脂血干扰浓度上升而降低，或能在一定程度上说明以上现象的发生机制。

综上所述，日立7180生化分析仪应用国内生化试剂，抗干扰性能较好，试验结果能反映标本不同浓度的溶血、脂血、黄疸干扰物对各生化项目的干扰情况，对提高临床判断的准确性及相关检验检测方法的研究具有参考意义。将来可能对仪器结合相关研究结果进行开发,使仪器能自动辨别血清的黄疸浓度是否对项目造成影响，并提供自动复查或自动复查提示，极大地降低检测的差错率。