蒋大程，高 珊，高海伦，邱念伟

(曲阜师范大学 生命科学学院，山东 曲阜 273165)

1921年，Folin首创了测定可溶性蛋白质含量的方法，此法的原理是蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸残基(酚基)与酚试剂(磷钨酸-磷钼酸)可发生蓝色反应，蓝色化合物的颜色深浅与蛋白质浓度呈正比。这一方法被命名为Folin-酚试剂法，该法的缺点是灵敏度较低[1]。1951年，Lowry对Folin法进行了改进，他发现在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键可与碱性铜试剂中的Cu2+螯合，形成蛋白质-铜复合物，该复合物能够与Folin酚试剂反应产生蓝色化合物[1-2]，这一改进大大提高了测定的灵敏度，改进后的方法被称为“Lowry法”。不过Lowry法仍存在测定范围窄、使用试剂多、干扰物质多、耗费时间长、反应时间难以控制等缺点[3-4]。1976年美国科学家Bradford用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的方法来定量测定蛋白质含量。考马斯亮蓝法是目前实验室中最常见、灵敏度最高的一种测定蛋白质含量的方法[5-6]。它将比色法和染料结合法相结合，与其他传统方法相比具有许多突出的优点，被广泛应用于各类生物材料的可溶性蛋白含量测定，是生物化学、植物生理学、分子生物学、食品科学等实验课程中的经典实验项目之一。首先，考马斯亮蓝法所需的样品量少，蛋白质与染料结合后产生的复合物颜色稳定，消光系数高，光吸收值随蛋白质含量的变化比Lowry法灵敏得多，可检测的蛋白质数量低达1 μg[7]。其次，该方法测定速度快，完成一个样品的测定，只需要5 min左右。第三，不像Lowry法那样试剂较多，费时费力，需要严格控制反应时间[8]，考马斯亮蓝法操作简便，只需加一种考马斯亮蓝试剂，适合于大批量样品蛋白质含量的测定。……