张 志，张丽丽，，刘 爽，单 虎，李晓成，王树双

（1. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032；2. 青岛农业大学，山东青岛 266019）

猪细小病毒（Porcine parvovirus，PPV）属于细小病毒科，是一种单股非囊膜线性DNA病毒，基因组大小为4～6.3 kb[1]。PPV最早发现于1965年，主要引起母猪不孕不育，以及产死胎或木乃伊胎等繁殖障碍症状，是影响养猪业的重要疫病之一[2]。2016年Palinski等[3]首次从美国健康猪的棉拭子中，通过基因组测序鉴定出一种新的PPV亚型病毒，并将其命名为PPV-7。该病毒的ORF与狐蝠细小病毒2和火鸡细小病毒TP1-2012/HUN 毒株之间的同源性分别为42.4%和37.9%，因此把这3种病毒归为一个新的属Chapparvovirus。

2017年我国Xing等[4]也从2014年保存的广东省2个商品代猪场的猪血清中检测到了PPV-7，表明我国已有PPV-7感染的存在，且至少可以追溯到2014年以前。本实验室在前期工作中用普通PCR方法也鉴定并分离到一株PPV-7病毒。为进一步了解PPV-7在我国猪场的流行状况，本研究以此病毒为参考毒株，构建了PPV-7 Taqman实时荧光PCR方法，并选择我国部分省市的猪场样品进行了实际检测。本方法的建立为开展PPV-7流行病学调查、监测和诊断等提供了技术支撑。

1 材料与方法

1.1 样品来源

96份猪病料：来自福建、山东、河南等省份，表现发热、腹泻、流产等临床症状的发病猪群。

1.2 病毒

PPV-7病毒株SD10：本实验室鉴定和分离；猪圆环病毒2型（PCV-2）、猪圆环病毒3型（PCV-3）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒1型（PPV-1）：本实验室分离鉴定和保存。

1.3 主要试剂

Real Time Taq 试剂盒（RR390A）、pMD-18T vector和DH5α感受态细胞：宝生物工程（大连）有限公司产品；病毒DNA提取试剂盒（DNAZol）：Life公司产品。

1.4 引物设计

参考PPV-7基因组序列（KU563733）和文献[10]的检测方法，并在其基础上进行改进，设计1对新引物PPV7-F1和PPV7-R1，以及1条荧光探针引物PPV7-P1。……