肖朋朋 ，李成辉 ，张金勇 ，韩继成 ，郭晓芳，周红宁 ，鲁会军 ，金宁一

（1. 延边大学医学院，吉林延吉 133002；2.军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所，吉林长春 130122；3. 云南省寄生虫病防治所，云南普洱 665000）

乙型脑炎（Japanese encephalitis，JE）由乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）感染引起，在亚洲和太平洋地区广泛流行[1-3]，每年约有3.5万～5万人感染，1万～1.5 万人死亡[1-3]，且50%的患者出现后遗症[4-6]。全球近300万人暴露在JE流行地区[2-3]。由于流行地区旅游业的发展，JE发病率不断增加[7]。云南省南部地区被北回归线贯穿，地形地貌独特，具有热带、亚热带气候特点，终年平均温度在20 ℃左右，平均降水量约8 mm/d，利于蚊类滋生和繁殖，全年均有蚊类分布[8-9]。JEV是云南省分布最广、危害较大的一种虫媒病毒，主要流行基因I型和III型。在云南省，基因I型最早分离于1977年，1978—2004年的分离株几乎均为基因III型（1982年分离到基因I型），近十年基因I型成为主要流行型[10]。三带喙库蚊为JEV主要传播媒介[11-12]，猪是JEV重要动物宿主[13]，从而形成了“猪-蚊虫-人”的循环链[14]。对蚊携带JEV的检测和调查，有益于进一步掌握病毒流行情况，及时预警JE流行。

本研究对云南省南部地区蚊携带JEV进行了调查检测，对扩增的JEV基因进行了遗传进化分析，以便为该地区的JE防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

DNA聚合酶、dNTP、ddH2O：从TaKaRa公司购置；引物：吉林省库美生物科技有限公司合成；RNA提取试剂盒：采购于杭州博日科技有限公司；反转录试剂M_MLV反转录酶、RNA酶抑制剂RNasin®：购置于Promega公司。

1.2 蚊样品采集

2016年8—10月，从南部西盟县（N22º 65'，E99º59'）、 宁 洱 县（N23º06'，E101º04'）、 思 茅区（N22º79'，E100º98'）、 景 洪 市（N22º00'，E100º77'），采集三带喙库蚊、中华按蚊、骚扰阿蚊、白纹伊蚊、达勒姆阿蚊及淡黄蓝带蚊共计6 952只，冻存于液氮中待用。……