猪圆环病毒2型青海分离株的分子鉴定及进化分析
2018-09-07赵玉清
赵玉清
(青海省海北藏族自治州畜牧兽医科学研究所,青海海北 812200)
猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)属于圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属(Circovirus)的DNA病毒,其基因组为环状单链DNA分子,长度约1 767 bp,主要有Rep和Cap两个基因完成病毒的复制组装等功能[1-2]。PCV有多种血清型,如PCV1、PCV2和PCV3型等。其中:PCV1无致病性;PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning pigs multisystemic wasting syndrome,PMWS)的主要毒株[3-4];PCV3是在美国首先报道发现的新毒株,能引起猪的皮炎肾病综合征、繁殖障碍及心脏和多系统的炎症反应,目前在我国河北、福建、广西等多个省份都能检测到,与PCV1和PCV2处于不同的进化分支,属于新型PCV[5-8]。
PCV主要通过垂直传播(透过胎盘屏障)和水平传播(通过阳性带毒猪的鼻腔液、粪便和尿液等排泄物)而感染其他猪群[9-10]。血清流行病学调查发现:德国猪群的PCV血清抗体阳性率高达85%,英国为86%,北爱尔兰为92%;我国江西、天津、北京、山东、河南、河北、吉林、福建等8个省份猪群的抗体阳性率都在50%以上[11-13]。可见,PCV在全球流行广泛,给养猪业造成了巨大经济损失。
本研究对青海省不同猪场发病猪群样品,通过PCR检测PCV2 ORF2基因,分析基因序列、氨基酸序列和进化树,从而为我国PCV感染的诊断、预防控制提供依据。
1 材料与方法
1.1 病料与毒株
采自青海省3个猪场的发病猪群。对表现呼吸困难、咳嗽、精神沉郁、行动迟缓、皮肤苍白、被毛脏乱、厌食消瘦、生长迟缓的猪进行剖检,采集剖检猪的淋巴、脾脏、肾脏和肝脏组织。每个猪场采集样品6份,共18份样品,用PBS液匀浆离心(5 000 r/min,20 min)取上清,-80 ℃保存备用。
1.2 主要试剂与仪器
PCR-Premix Taq™(TaKaRa Taq™ Version 2.0 plus dye)和DNA marker DL 2000:购于宝生物工程(大连)有限公司;……
