鄂顺梅 陈富 龙一飞 林冬玲 蔡壬辛

广州中医药大学第二附属医院检验医学部（广州 510006）

铜绿假单胞菌（pseudomonas aeruginosa，PA）是一种条件致病菌，临床分离率较高，易造成长期反复感染［1］。群体感应系统（quorum sensing，QS）是广泛存在于细菌群体中的依赖细菌密度的信号通讯系统，可调控细菌种群内各种毒力基因的表达，与细菌致病性和耐药性密切相关［2］。PA有3个重要的QS系统：Las系统，Rhl系统和Pqs系统。LasI和rhlI基因分别编码3⁃O⁃C12⁃HSL和 C4⁃HSL两种酰基高丝氨酸内酯（acylhomoserine lactone，AHLs）信号分子，AHLs结合并激活各自的转录激活剂LasR和RhlR，最终调控多种毒力基因的表达［3］。Las系统主要调控外毒素A（exotoxin A）、LasA蛋白酶、碱性蛋白酶（alkaline protease）、外酶（exoen⁃zymes）和弹性蛋白酶（elastase）的合成；Rhl系统可调控鼠李糖脂（rhamnolipid）和磷脂酶（phospholi⁃pase）的合成［4-5］。Pqs系统是PA特有的QS系统，PQS信号分子与其受体PqsR结合后可活化pqs⁃ABCDE和phnAB操纵子的表达，产生更多的PQS信号分子和绿脓菌素［6］。多种毒力因子的释放是PA感染难治性的主要原因，因此抑制QS系统从而调控毒力因子的释放是目前治疗PA感染的主要方向［7-8］。本研究拟通过lasI和rhlI基因的缺失，以及利用QS系统抑制剂阿奇霉素（azithromycin，AZM），观察两者对PA毒力基因表达的影响。

1 材料与方法

1.1 实验材料和试剂野生型PA菌株由美国罗切斯特大学Barbara H.Iglewski教授馈赠；LasI基因缺失的PA菌株（PA⁃ΔlasI）、RhlI基因缺失的PA菌株（PA⁃ΔrhlI）和两者均缺失的PA菌株（PA⁃Δla⁃sIrhlI）由本实验室构建；RNA提取试剂盒（Promega公司）；逆转录试剂盒（TaKaRa公司）；荧光定量PCR试剂盒（Thermo Fisher公司）；阿奇霉素（广东省药品检验所）。

1.2 微量肉汤法测定阿奇霉素的MIC值参照CLSI M07⁃A9测定阿奇霉素的MIC值。将100μL倍比稀释后的阿奇霉素药液加入96孔板。……