谢琳 丁宁 徐灵博 姜怡邓 杨晓玲 马胜超 焦运

1宁夏医科大学基础医学院（银川 750004）；2宁夏医科大学总医院（银川 750002）

同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）是蛋氨酸代谢的中间产物，已被证实是动脉粥样硬化（ath⁃erosclerosis，As）重要的独立危险因子之一［1］。最近的研究表明Hcy水平与肝病的发生发展关系密切［2］，同时有文献报道［3］Hcy可以诱导肝细胞发生内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERs）。叉头状转录因子O1（forkhead box transcription factor O1，FoxO1）是FoxO亚家族中的主要成员之一。据报道，FoxO1主要在糖脂代谢活跃的器官，如肝脏、脂肪和骨骼肌等中表达，在动物的生长发育、细胞分化、代谢及凋亡信号转导等方面都发挥着重要的生物学功能［4］。ERs是各种原因导致的未折叠或错误折叠蛋白质在内质网的堆积，而长时间处于ERs状态或ERs超过自身处理能力时，内质网会启动程序性细胞凋亡过程，从而引起细胞凋亡［5］。DNA甲基化作为一种重要的表观遗传学调控，常发生在富含CpG岛序列的胞嘧啶5′位上，使得被修饰的DNA空间结构或染色体结构发生改变而导致基因表达改变［6］。然而，有关同型半胱氨酸诱导的内质网应激致肝细胞凋亡的报道却鲜有报道。因此，本研究主要探讨Hcy诱导ERs致肝细胞凋亡过程中FoxO1的调控作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器同型半胱氨酸、叶酸和维生素B12（美国，Sigma）；Annexin V⁃FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（上海，Best bio）；基因组DNA提取试剂盒、总RNA提取试剂盒（北京，天根）；逆转录和qRT⁃PCR试剂盒（美国，Thermo Fisher）；蛋白提取试剂盒、蛋白定量试剂盒（南京，凯基）；DNA甲基化修饰试剂盒（美国，ZYMO）；FOXO1抗体（英国，Abcam）；引物由上海生工生物工程有限公司合成。……