李彦　吕纯莉　肖代敏

【中图分类号】R734.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）06--01

CIK细胞又称自然杀伤样T淋巴细胞，是新一代过继性免疫治疗的首选方案，具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、毒性小、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感等优点[1-2]，是目前发现的杀瘤活性最强的免疫效应细胞之一。目前认为，CD3+CD56和CD3+CD8+表型T淋巴细胞是CIK群体中的主要效应细胞，发挥着重要的抗肿瘤作用。参芪扶正注射液是中药类新药，具有显著的免疫调节作用[3]。本研究利用參芪扶正注射液的特性，将其添加于临床应用的CIK培养体系，探讨中药联合CIK抗肿瘤作用的免疫学机制，旨在为CIK细胞培养寻找更优化的路径和方法。

一材料与方法

1.材料与试剂

收集癌症病人全血25ml；淋巴细胞分离液（Ficoll）：天津太平洋科技有限公司；参芪扶正注射液：丽珠集团利民制药厂；抗人CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-APC、CD56-FITC 抗体：美国Becton Dickinson公司。

2.方法与步骤

2.1 CIK细胞的制备

取肿瘤患者的外周血25ml，按2：1的比例用PBS稀释血液，再加等体积的淋巴细胞分离液，2000rpm离心20min，小心吸取白膜层于50ml离心管中，加入PBS，1200 rpm离心5 min，弃上清，用含有10%胎牛血清的GT-T551培养基悬浮细胞，调整细胞浓度为1×106/ml，接种于培养瓶中，加入终浓度为1000U/ml的IFN-γ，置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。培养24 小时后加入浓度为50 ng/ml的CD3单抗和300 U/ml 的IL-2，每3 天换液同时补充300 U/ml IL-2。

2.2 实验分组

实验分为三组，分别是对照组、50μl参芪组、100μl参芪组。对照组按CIK细胞制备方法培养；50μl参芪组和100μl参芪组按CIK细胞制备方法培养的同时分别加入50μL/ml和100μL/ml参芪扶正注射液。

2.3 CIK细胞增殖测定

在细胞培养的第6天和第12天分别取各组培养的细胞悬浮液，用台盼蓝染色法计数CIK细胞，并除以第0天的初始细胞数，得出实际的增殖倍数。……