张磊，王利刚，付莎莉，吴丹，陈欣，苏敏，黄思瑜，杨小珊

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121）

0 引言

在奶牛饲养中使用β-内酰胺环类抗生素可导致生产的生鲜牛乳中含有抗生素残留，国际和国内均规定生鲜乳中抗生素“不得检出”[1]。2009年，全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治领导小组发布《食品中可能违法添加的非食用物质名单(第二批)》，将β-内酰胺酶（金玉兰酶制剂）列入乳与乳制品中可能违法添加的非食用物质，生鲜牛乳中添加β-内酰胺酶的现象得以改善[2]，但仍有生鲜乳中检出β-内酰胺酶的报道[3-8]。

目前，检验中用到的β-内酰胺酶的检测方法有碘量法[9]、酸度法[10]、高效液相色谱法[11]、免疫法[12]、微生物法（杯碟法）等[13]。本研究将杯碟法、碘量法和基于免疫法的快速检测条法三种实验室常用检验方法进行了比较和讨论，为实验室β-内酰胺酶的检验工作提供参考。

1 实验

1.1 仪器与试剂

恒温培养箱，高压灭菌锅，牛津杯，麦氏比浊仪，Charm ROSA 56C孵育器，Charm ROSA读数仪。

藤黄微球菌(Micrococcus luteus)CMCC(B)28001，磷酸二氢钾，磷酸氢二钾，营养琼脂，抗生素检测用培养基Ⅱ，Charm MRLβ-内酰胺酶快速检测条，浓度为0.1 mol/L碘标液，脱脂奶粉。

青霉素标准品，β-内酰胺酶标准品，舒巴坦标准品。

1.2 试剂配制

磷酸盐缓冲溶液（pH=6.0）：无水KH2PO4为8.0 g，无水K2HPO4为2.0 g，蒸馏水加至1 000 mL，121℃灭菌15 min。

青霉素标准溶液：称取适量青霉素标准物质，用磷酸盐缓冲溶液溶解并定容为0.1 mg/mL的标准溶液，现配现用。

β-内酰胺酶标准溶液：量取β-内酰胺酶标准物质，用磷酸盐缓冲溶液稀释至所需浓度，现配现用。……