陈睿 佘燕玲 江婷 周珊瑶 史华彩 黎程

1广东省第二人民医院，广东省传统医学与运动伤害康复研究所（广东广州 510317）2中山大学附属第三医院放射科（广东广州 510630）

氧是细胞生存及能量代谢的重要底物，缺氧可影响机体代谢功能及细胞存活。缺氧诱导的肌萎缩可见于过度训练、高原低氧、下肢动脉闭塞症和慢性非阻塞性肺疾病等[1-3]。近些年来研究认为，自噬参与骨骼肌细胞内稳态平衡及肌萎缩相关疾病的生理病理过程[4，5]。自噬是细胞通过形成双层膜结构的自噬体，将自身受损的细胞器和大分子物质包裹并运送至溶酶体进行分解代谢的过程。适当的自噬有利于细胞在不良环境中进行防御，而过量的自噬则可能导致细胞死亡[6]。本实验探讨二氯化钴（cobaltous chloride，CoCl2）诱导缺氧对肌细胞萎缩的调控机制。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与材料

CO2培养箱：赛默飞世尔科技公司。多功能酶标仪：Bioteck公司。透射电子显微镜：日本电子株式会社。荧光定量PCR仪：美国ABI公司。电泳转印系统：北京凯元公司。化学发光成像系统：上海天能科技有限公司。高糖DMEM培养基购于Gibco。胎牛血清、马血清购于Hyclone。CoCl2购于Sigma。3-Methyladenine（3MA）购于Selleck。吉姆萨染色液、ECL发光试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。活性氧（reactive oxygen species，ROS）检测试剂盒、诱导因子-1 α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）、Bcl2/腺病毒E1B 19kDa相关蛋白3（Bcl2/adenovirus E1B19kDa interacting protein 3，BNIP3）、肌肉萎缩盒F基因（muscle atrophy F-box，MAFbx）一抗购于abcam。微管相关蛋白1轻链-3（microtubule associated protein1 light chain 3，LC3）、tubulin一抗、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔购于ABclonal。转录试剂盒及聚合酶链反应（PCR）扩增试剂盒购自Takara公司。引物由上海生工生物工程有限公司合成。……