流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立
2018-08-07朱建波杨振兴苗海生何于雯孟锦昕李华春
朱建波,杨振兴,肖 雷,高 林,苗海生,何于雯,孟锦昕,杨 恒,李华春
(云南省畜牧兽医科学院,云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室, 昆明 650224)
流行性出血病(epizootic haemorrhagic disease,EHD)是通过节肢昆虫库蠓传播流行性出血病病毒(EHDV),引起的一种非接触传染病[1]。该病能感染野生及家养反刍动物,特别是引起白尾鹿体温升高、黏膜和浆膜面广泛出血,并常于昏迷状态下死亡[2]。牛感染发病,症状主要是发热、厌食、溃疡性口炎、呼吸疾病、一些组织器官特别是舌的出血坏死,茨城病由EHDV-2病毒型感染引起,可致牛消瘦、脱水,最后因肺炎而死[3]。部分羊也能感染发病,症状主要表现为皮下水肿,心外膜、眼结膜和瘤胃及肠的浆膜表面出血,胸部和心包囊有黄色液体,鼻排带绿色黏质物[4]。此病在流行期危害较大,严重影响着畜牧业和国际贸易的发展,世界动物卫生组织(OIE)已将EHD列为法定报告传染病[5]。
近年来,云南、新疆、内蒙古、广西和广东等地进行的血清学调查均检出EHDV阳性血清,特别是存在对牛有较强致病力的EHDV-2、6和7型[6-9]。2015年曹颖颖等[10]在广西分离到EHDV-5型毒株,2016年吕敏娜等[11]在广东分离到EHDV-1型毒株,本实验室自2012年至2017年间在云南牛体内分离到多株EHDV-1、2、5、6和7型毒株。以上结果表明EHDV在我国分布广泛,存在发生该病的风险,因此该病的血清学检测方法研究对我国进出口贸易及疫病防控具有重要意义。
目前,有学者用表达的EHDV VP7蛋白作包被抗原建立检测抗体的间接ELISA方法,或用EHDV群特异性单克隆抗体建立了C-ELISA检测方法,但均无商品化试剂盒[12-14]。……
