栉孔扇贝Foxl2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与检测
2018-08-07刘晓玲王振东孙涵甜王振华赵振军
刘晓玲,王振东,孙涵甜,王振华,赵振军,李 忌
(烟台大学生命科学学院,山东烟台 264005)
Foxl2(forkhead box l2)是叉头框转录因子基因,研究发现其在脊椎动物卵巢中高表达,而在精巢中弱表达或不表达[1],深入的功能研究表明,该基因参与哺乳动物卵巢功能维持[1-2]。该基因在无脊椎动物中的相关研究相当有限,在海胆 (Strongylocentrotus purpuratus)[3]、皮 海 绵(Suberites domuncula)[4]、太 平 洋 牡 蛎(Crassostrea gigas)[5]和 栉 孔 扇 贝 (Chlamys farreri)[6]中有表达研究,且其表达研究主要集中在转录水平:其中 TU等[3]对紫色球海胆的Foxl2研究仅发现胚胎期都有表达,是一种合子基因,未有深入研究。DHEILLY等[5]利用基因芯片技术通过差异检测发现Foxl2在太平洋牡蛎中是雌性相关基因,在卵巢中特异表达。刘晓玲等[7]发现Foxl2在成体栉孔扇贝中具与已报道的脊椎动物一样的明显性别二态性表达,推测该基因在性别稳定的无脊椎动物栉孔扇贝的卵巢中发挥一定功能。LI等[8]通过转录组测序发现Foxl2在虾夷扇贝 (Patinopecten yessoensis)卵巢中高表达,推测参与卵巢决定和分化。然而上述无脊椎Foxl2的性别相关表达研究仅集中在转录水平,仅ADELL等[4]利用免疫组化技术对皮海绵的Sd-Foxl2进行了蛋白水平表达检测,发现在各种细胞中都有表达,认为在皮海绵中该基因不是性别相关基因。
综上,Foxl2基因在低等动物中的功能尚需深入研究。在前期研究的基础上,本研究继续选取性别稳定的栉孔扇贝为研究对象,通过PCR克隆栉孔扇贝Foxl2基因,构建了大肠杆菌表达载体并诱导获得重组蛋白,纯化后制备了多克隆抗体,探索了Foxl2蛋白在性腺中的表达,旨在为进一步研究Foxl2在栉孔扇贝卵巢中的作用奠定实验基础。……
