张鑫丽 沈国松 李雯雯 阳鑫妙

严重联合免疫缺陷病（severe combined immunodeficiency，SCID）是一组有不同基因异常所致的严重T细胞缺乏或功能异常，并伴随B淋巴细胞功能异常的疾病[1]。SCID是一类比较多见的原发性免疫缺陷病，新生儿的发病率为1/75 000～1/100 000[2]。目前发现的SCID相关基因有 13 个，包括 IL-2RG、ADA、JAK3、RAG1、RAG2、IL-TRa、DCLRE1C、LIG4、DNA-PKcs、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD45[3]。其中LIG4基因突变引起的SCID称为LIG4综合征，这是一种非常罕见的常染色体隐性遗传病，患儿常表现为发育异常和肿瘤倾向[4]。LIG4综合征是严重的致死性遗传病，药物治疗效果差，早期基因诊断行免疫重建是治疗和延长已出生患儿生存期的最好办法。但是，预防患儿出生是最终目标。因此，本研究通过应用芯片捕获后行高通量测序法检出先证者的基因突变，成功对其母亲再次妊娠进行产前诊断，有效避免患儿的出生；现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 先证者女，足月顺产出生，头围偏小，体重偏轻。1岁时因接种疫苗后开始持续有中耳炎、腹泻、巨细胞病毒感染，血常规检查提示全血细胞减少，对抗生素和免疫球蛋白的治疗效果差，一直转辗于本院与外院治疗。当时先证者及其父母均抽取外周血作基因检测。先证者3岁时因颅内肿瘤死亡。父母表型正常。现母亲再次怀孕（高龄并孕20周），为避免再次分娩LIG4综合征患儿，2016年11月8日来本院作产前诊断。

1.2 目标序列捕获 抽取先证者及其父母外周静脉血5ml，标准流程提取基因组DNA（QIAamp DNA Blood Midi Kit，德国Qiagen）。质检合格的基因组DNA使用Covaris LE220超声波仪（美国Massachusetts）进行随机打断，产生200～250bp的随机片段。随后进行Ampure Beads纯化，将纯化后的DNA片段进行末端修复、加“A”以及加接头反应，再经过连接介导PCR（ligationmediated PCR，LM-PCR）进行扩增和纯化。……