食品中霉菌、酵母菌检验能力验证的影响因素探讨

2018-08-03罗秋敏

现代食品 2018年11期

◎ 覃晓，罗秋敏，王玲

（桂林市食品药品检验所，广西桂林 541002）

食品中微生物能力验证是检验实验室检验技术水平的重要手段，确定实验室进行某些特定的检测能力，以考察实验室检测能力的外部质量活动，增加客户对实验室的信任，提高实验室的知名度[1]，也是实验室内部质量控制的一种方法补充。对于食品中微生物限量的检验霉菌、酵母菌的检验计数是最常规的指标。虽然霉菌、酵母菌的检验方法看似简单，但由于食品种类繁多、成分复杂，受污染程度不同，加上霉菌、酵母种类多样，它们对环境的温湿度及营养成分的要求不同，要想在同一条件下培养出各种霉菌和酵母也实属不易[2]。

为了提高检验结果的准确性，本实验室在参加食品中微生物能力验证的过程中采用几种检验方法同步试验，找出了影响计数结果的因素，经综合分析，取得了满意的结果。

1 实验材料

1.1 样品

能力验证样品1（17-T019）、能力验证样品2（17-Q357），均为中国检验检疫科学研究院测试评价中心提供。

1.2 菌种、培养基及稀释液

黑曲霉（Aspergillus niger，ATCC 16404）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae，ATCC 9763），均购自广东省微生物菌种保藏中心。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）、孟加拉红琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂（SDA）、沙氏琼脂（SDA，含氯霉素）、生理盐水，生产厂家均为北京陆桥技术有限责任公司。

1.3 仪器及材料

生物安全柜、生化培养箱、高压灭菌锅、移液枪（1～5 mL）、灭菌枪头（1 mL）、灭菌刻度吸管（1 mL）、一次性塑料平皿。

2 试验方法及结果

2.1 样品处理

按能力验证操作规程指南，样品用40 mL稀释液水化。取样品1、样品2置于室温，分别开启样品，立即加入10 mL稀释液进行溶解，吸出放入无菌瓶中，再反复用余下的稀释液清洗西林瓶内壁，回收清洗液放入上述无菌瓶中，摇匀，作为样品原液。再按无菌操作以10倍梯度作不同程度的稀释。（※本次冻干的能力验证样品等同于40.0 mL的食品样品。）

2.2 检验方法

2.2.1 不同培养基

分别吸取不同稀释级别的17-T019及17-Q357样品试液1 mL注皿，平行2份，分别倾注冷却至约45 ℃的马铃薯葡萄糖琼脂培养基、孟加拉红琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、沙氏琼脂（含氯霉素）各约18 mL，摇匀，静置冷却，28 ℃正置培养。结果见表1。

表1 不同培养基比较表

2.2.2 不同人员操作

两人分别取两份样品17-T019及17-Q357的原液，用移液枪按无菌操作各自稀释成不同浓度的供试液，吸取1 mL注皿，平行2份，分别倾注约45 ℃马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），摇匀，静置冷却。以28 ℃正置培养观察。结果见表2。

2.2.3 不同吸注器

分别用刻度吸管和移液枪对样品17-T019及17-Q357的原液按无菌操作进行不同浓度的稀释，取1 mL注皿，平行2份，分别倾注约45 ℃马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），摇匀，静置冷却。以28 ℃正置培养观察，结果见表2。

表2 同一种培养基不同人员操作及不同吸注器比较表

2.2.3 不同培养时间

对样品17-T019及17-Q357的4种培养基平皿不同时间段进行观察计数，发现培养24 h，4种培养基肉眼观察无菌落生长，培养36 h有少量霉菌菌丝，培养48 h霉菌和酵母菌生长已经达到峰值，培养60 h霉菌和酵母无明显增殖现象，霉菌菌丝已影响平皿的观察，培养72 h霉菌已产生孢子，并且菌丝已覆盖整个平皿，造成霉菌和酵母菌计数困难。

2.3 重复验证试验

取两份样品原液和本实验室里黑曲霉和啤酒酵母两个阳性菌分别用上述培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基进行重复实验。结果对于能力验证的两份样品重现性较好，玫瑰红钠琼脂和沙氏葡萄糖琼脂对能力验证样品检测结果均高于马铃薯葡萄糖琼脂培养基、孟加拉红琼脂培养基及沙氏琼脂（含氯霉素），上述5种培养基对于本实验室的两个阳性菌，检测结果存在一定规律性，因此，检测食品中霉菌、酵母所用培养基和检测药品中霉菌、酵母所用培养基由于所含成份有所不同，检测结果存在差异。结果见表3。