马盼，贾云宏

（1.锦州医科大学研究生学院，辽宁 锦州 121001；2.锦州医科大学药学院，辽宁 锦州 121001）

肝细胞癌进展的特点是细胞异常分化快，快速浸润性生长，转移早，恶性程度高，预后差。尽管肝移植、手术切除或肝动脉化疗栓塞术（transcatheter arterial chemoembolization, TACE）治疗可在一定程度上延缓病情的进展，然而治疗肝细胞癌的最大障碍仍然是侵袭和转移，近年来研究[1]证实，肝再生磷酸酶3（phosphatases of regenerating liver 3, PRL-3）是一种与肿瘤转移相关的磷酸酶，它的过度表达增加癌细胞的运动和侵袭。索拉非尼作为一种新型的分子靶向药物在临床实践中已显示出显著的疗效。索拉非尼能否下调肝癌细胞中PRL-3的表达，降低肝癌细胞的侵袭力鲜见相关文献报道，本研究旨在探讨索拉非尼对MHCC97-H肝癌细胞增殖抑制情况，对PRL-3蛋白表达水平的影响，以及对肝癌细胞侵袭力的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

MHCC97-H肝癌细胞株购自上海细胞生物研究所，索拉非尼由德国拜耳公司生产，鼠抗人PRL-3多克隆抗体购自美国Bio Legend公司，胰蛋白酶、四甲基偶氮唑蓝（MTT）等均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 37℃，5% CO2饱和湿度，DMEM培养液中生长，含有10%胚牛血清、青霉素100 u/ml及链霉素100 mg/L，消化传代使用0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA液。

1.2.2 实验分组 索拉非尼由100%二甲基亚砜（DMSO）溶解，实验组分别加入2、4、8和16 μmol/L的索拉非尼并且分别作用24、48和72 h以筛选最适合浓度和时间，对照组不加索拉非尼。

1.2.3 瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态 准备铺有盖玻片的6孔培养板以便于对数生长期细胞接种，同时设阴性对照，加入FTY720，经索拉非尼作用48 h，滴加无水乙醇风干后加瑞氏吉姆萨染液染色30 s，PBS浸泡2 min，洗去染液，固定、晾干、封片和镜检拍照。……