高力扬，李锦宏，陈兵，杨帆，岑学程，廖壮槟，龙霄翱，王思捷

（1.宁夏大学 生命科学学院，宁夏 银川 750021；2.广东医科大学附属医院 神经外科，广东 湛江 524001；3.广东医科大学附属医院 临床研究中心，广东 湛江 524001）

胶质瘤占脑部恶性肿瘤的60%，世界卫生组织神经系统肿瘤分级将其分为低级别和高级别，高级别胶质瘤中位生存时间只有10～15个月。胶质瘤主要的治疗手段是最大安全范围内手术切除肿瘤[1]。由于胶质瘤具有侵袭性的自然特性，手术治疗后必须行放化疗。放射治疗致力于控制或者杀灭术后残留的肿瘤细胞，而化学药物治疗带来的损伤和肿瘤辐射抗性影响其疗效[2]。目前研究发现一些细胞信号通路可能参与胶质瘤辐射抗性[3-6]。因此研究胶质瘤辐射抗性产生的机制对当前临床治疗有重要意义。

1　材料与方法

1.1　材料与仪器

细胞增殖检测试剂盒（cell counting Kit-8,CCK-8）（上海碧云天生物技术研究所），IWR-1-endo抑制剂（美国Selleck Chemicals公司），双抗含青霉素、链霉素购于美国Hyclone公司，胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）、改良伊格尔培养基（dulbecco's modified eagle medium,DMEM）购于美国Gibco公司，巢蛋白（Nestin）、β微管蛋白Ⅲ（β-tubulin Ⅲ）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、CD133及Ki-67抗体购于北京中杉金桥公司。德国Leica公司的DMI3000B荧光显微镜、日本电子株式会社的JEM-1400+GATAN CCD832投射电子显微镜由广东医科大学附属医院临床研究中心提供，瑞典Eleketa公司的直线加速器由广东医科大学附属医院放疗科提供。

1.2　方法

1.2.1U87细胞系的培养及诱导人脑胶质瘤U87细胞株复苏后，加入含有双抗（青霉素50μ/ml，链霉素50 mg/ml）和10% FBS的DMEM高糖型培养基悬浮细胞，置于37℃、5%二氧化碳CO2培养。待细胞进入对数培养期后，取1/3细胞进行传代培养，或者取1×106个细胞加入1 ml冻存液（80%完全培养基+100μl FBS+100μl二甲基亚砜）于-80℃超低温冰箱中短期冻存。……