戴研平，王平，高晓勤

（1.贵州医科大学 基础医学院，贵州 贵阳 550004；2.遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563006）

砷是一种广泛存在于自然界的类金属元素和人类致癌物[1]。研究表明，慢性砷暴露可影响人类的生殖和发育，但目前关于砷致癌及生殖毒性的具体机制尚不明确[2-4]。血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）及其受体2（vascular endothelial growth factor recepector 2,VEGFR2）与精子的发生和成熟有关。目前尚未见砷中毒及VEGF、VEGFR2与男性不育相关性的报道。本实验通过研究VEGF、VEGFR2在慢性砷中毒大鼠睾丸中的表达变化，检测生精上皮细胞凋亡情况，探讨慢性砷中毒对大鼠睾丸损伤的机制，为慢性砷中毒不育的防治提供科学依据。

1　材料与方法

1.1　实验动物

选择体重160～200 g健康清洁级雄性SD大鼠40只，由贵州医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCK（黔）2002～0001。动物饲养环境温度23～25℃，相对湿度60%～65%。实验期间，大鼠可自由摄食、饮水。

适应性饲养1周后，将大鼠随机分为4组：对照组（蒸馏水），以及低（2.4 mg/L）、中（12.0 mg/L）、高（60.0 mg/L）剂量染毒组，每组10只。采用自由饮水方式连续染毒6个月。每天测定并记录大鼠体重，观察大鼠外观行为变化。

1.2　主要试剂

VEGF、VEGFR2兔抗鼠多克隆抗体（英国Abcam公司），细胞凋亡检测试剂盒（武汉博士德生物工程公司），亚砷酸钠（分析纯，北京化工厂）。

1.3　方法

1.3.1免疫组织化学法睾丸石蜡切片，用二甲苯化蜡至水，0.01 mmol/L枸橼酸缓冲液（pH 6.0）微波修复15 min，冷却至室温，30 ml/L过氧化氢封闭内源性过氧化物酶15 min，10 ml/L Triton-100浸泡30 min增加细胞通透性，山羊血清37℃封闭30 min后加一抗（1∶50），4℃孵育过夜，恢复室温40 min后滴加山羊抗兔IgG，37℃孵育1 h，DAB显色5 min，苏木精复染2 min，常规脱水、透明、封片。……