王小爽，何金蓉，于 姗，余 佳

中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 医学分子生物学国家重点实验室，北京 100005

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)由一系列发生在造血干细胞或祖细胞内的遗传学事件导致[1- 3]。尽管化疗对许多AML患者有效，但无效患者也很常见，而复发是治疗无效的最主要原因[3]。尽管人们对AML的发病机制已有一定了解，然而成年AML患者的总体生存率仍改善甚微[4]。2015年的一项研究显示，在使用常规化疗药物治疗时，只有35%～40%的年轻(≤60岁)和5%～15%的年长(>60岁)AML患者生存期能够超过5年[5]。因此，目前迫切需要深入了解AML发生发展的分子机制，从而为AML治疗开发出有效的靶向药物。

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine，m6A)修饰是mRNA和lncRNA最主要的一种修饰，在真核生物中非常保守，从酵母、植物到高等动物中都广泛存在[6]。RNA甲基转移酶甲基转移酶样3(methyltransferase-like 3，METTL3)等可介导m6A的修饰，通过对特定RNA进行修饰，调控mRNA的生成、降解和翻译。本研究观察了METTL3在AML细胞增殖中的作用，初步探讨了其调控机制。

材料和方法

材料Western及IP细胞裂解液、DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒和BCA蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物技术公司)，Anti-rabbit-METTL3抗体(英国Abcam公司)，抗兔二抗(北京中杉金桥生物技术有限公司)，Magna MeRIP m6A kit(美国Millipore公司)，Lipofectamine LTX转染试剂、M-MLV逆转录酶、细胞培养基RPMI- 1640和IMDM、进口胎牛血清(美国Thermo-Fisher公司)，RT-qPCR试剂(中国大连Takara公司)；构建质粒所需的内切酶(美国NEB公司)，细胞增殖(cell counting kit- 8，CCK- 8)试剂盒[东仁化学科技(上海)有限公司]，PolyATtract®mRNA Isolation System(美国Promega公司)，RNA片段化试剂(美国Ambion公司)，Agilent RNA 6000 Nano Kit(美国Agilent公司)，EpiQuik m6A RNA Methylation Quantification Kit(美国Epigentek公司)，mRNA富集试剂盒PolyATract mRNA Isolation Systems(美国Promega公司)。

细胞培养MOLM13细胞购自美国ATCC细胞库，悬于 RPMI1640完全培养基(10%胎牛血清)中，置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。