余 瑛，刘志云，余 磊，鲁秀敏

(重庆理工大学 药学与生物工程学院， 重庆 400054)

蛋白质是现代分子生物学中最重要的研究对象之一。蛋白质研究过程中通常需要通过紫外分析、同位素标记、酶标记等方法进行跟踪检测，过程繁琐。荧光蛋白由于检测方便且不影响蛋白质生物学活性，在分子生物学领域得到越来越广泛的应用，如在基因功能鉴定中用于基因定位[1-2]、基因调节[3-4]、蛋白质相互作用[5]研究等，在医药研发中用于肿瘤检测[6-8]、药物筛选[9-10]等。荧光蛋白通常需要特定波长的光源激发才能发出荧光，检测过程仍需要依赖昂贵的仪器。

mRuby2由斯坦福大学的Lin等[11]设计，是最明亮的单体红色荧光蛋白之一。在双荧光报告系统中利用Clover 和mRuby2替换CFP和YFP，可显著提高检测的灵敏性[11-12]。mRuby2作为荧光标记还用于观察真核活细胞迁移过程以及蛋白质在细胞中的分布、转移等现象[13]。

最近研究发现，荧光蛋白mRuby2能在原核系统中高效表达，产生穿透力极强的红色荧光。这种荧光蛋白在活细胞中的表达及体外纯化过程都能在日光下直观地呈现，方便随时对目的蛋白进行跟踪检测。本研究构建了mRuby2的原核表达菌株，观察了该基因在大肠杆菌中随诱导时间表达水平发生变化的过程，采用Ni亲和层析对mRuby2编码的重组红色荧光蛋白进行了纯化。mRuby2编码的红色荧光蛋白在表达及纯化过程中均呈现出极好的可视性和指示性，特别适合作为生化、分子生物学实验教学和蛋白标记的候选基因。……