□ 陈 勇 自贡检验检测院

糕点在我国生产和食用的历史悠久，南北糕点种类繁多，制作工艺差异大，生产者通常会加入各种色素，这些色素一般分为天然色素和合成色素。天然色素价格昂贵，合成色素价格低廉，为控制生产成本、吸引消费者眼球，生产者往往会在所生产的糕点中加入过量的合成色素，但如果食用合成色素过量，对人体具有毒害作用，因此，我国对合成色素的添加量有着严格规定。我国准许使用的人工合成色素有11种，最常见的有柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红、赤藓红、亮蓝等8种色素。本文通过对前处理方法的改进，采用液相色谱法测定糕点中的合成色素，该方法简单、快速、准确、稳定，解决了回收率不理想、稳定性差、操作繁琐等问题。

1 实验部分

1.1 主要仪器和试剂

主要仪器包括高效液相色谱：Agilent 1200；检测器：DAD；电子天平：AL204；纯水机：优普 UPH-1-10T；高速离心机：Xiang Yi H-1650；恒温水浴锅。

试剂有乙酸铵（优级纯）；亚铁氰化钾（分析纯）；乙酸锌（分析纯）；甲醇（HPLC级）

标准品有柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红、赤藓红、亮蓝（国家标准物质中心）。

1.2 色谱条件

色谱柱：welch xtimate C18（150 mm×4.6 mm×5 mm）；柱温：35℃；流动相为甲醇、0.02 mol/L乙酸铵溶液；梯度洗脱程序如下：时间/min分 别 是（0 min、9 min、11 min、12 min、16 min、19 min、19 min）； 甲 醇 /%（4%、4%、10%、20%、40%、90%、4%）；乙酸 铵 溶 液/%（96%、96%、90%、80%、60%、10%、96%）；流量为1.0 mL/min；进样量为10 µL；检测波长430～625 nm。

1.3 标准溶液配制

将标准品（柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红、赤藓红、亮蓝）分别用高纯水配制成1.000 g/L的标准储备液，精密吸取各标准储备液配制成浓度为0.05 g/L的标准使用液，再经过膜稀释后，按照1.2的色谱条件进行实验。

1.4 样品前处理

称取约5 g（精确至0.0 001 g）已制备处理好的样品，用20 mL水分数次将样品转移入100 mL烧杯中，超声提取10 min，取出后加入106 g/L的亚铁氰化钾溶液2 mL，摇匀，然后再加入220 g/L的乙酸锌溶液2 mL，摇匀后加热至沸，收集煮沸后的液体，然后再加水煮沸，直至无色为止。收集的液体放入蒸发皿中，在100℃水浴锅中加热浓缩至5 mL左右，后经离心机（10 000 r/min）离心10 min，取出上清液，用微孔滤膜过滤后上机待测。

2 结果与讨论

2.1 波长的选择

通过紫外-可见光谱扫描，柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红、赤藓红的最大吸收波长在400～600 nm，经过反复试验比较：其中柠檬黄在430 nm处具有最大吸收波长，亮蓝在625 nm处具有最大吸收波长，新红在530 nm处具有最大吸收波长，其他几种色素在500 nm处都能很好地被吸收。因此，本实验最终选择在柠檬黄430 nm、亮蓝625 nm、新红530 nm、其他5种500 nm处进行检测。

2.2 样品前处理的选择

由于全国各地的糕点各类繁多，其以含高蛋白的产品居多，所以怎样沉淀蛋白，使其不干扰样品的检测，是一个关键点。笔者通过反复多次试验及选取不同的沉淀剂进行处理、测试，最后选择了亚铁氰化钾和乙酸锌，再通过多次加水煮沸，收集沸水，浓缩，离心后过滤。这种方法处理过程简单，结果稳定，回收率高。

2.3 流动相的选择

本实验以甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液作为流动相，流速为1.0 mL/min。通过调整溶液比例，分别采用下面三种体积比（甲醇:乙酸铵）4:96、8:92、12:88进行试验，得到实验结果，当比例在4:96时，可以得到较好的峰面积，灵敏度也最高，见图1。

2.4 方法线性和检出限

在方法优化的条件下，这八种合成色素的质量浓度在1～20 mg/L范围内与色谱峰面积均呈良好的线性关系，相关系数为0.9 993～0.9 998，检出限（SN）为0.07～0.16 mg/kg，对10 mg/L的混合标准溶液进行测定，重复进样10次，其相对标准偏差在0.10%～1.0%。

八种合成色素的定量限（mg/L）、线性回归方程、相关系数、方法检出限（S/N≥3）（mg/L）分别是：柠檬黄（1.0、y=706.70x+0.2 830、0.9 993、0.0 005）；日 落 黄（1.0、y=622.27x+0.3 214、0.9 997、0.0 005）；苋菜红（1.0、y=461.03x+0.4 338、0.9 996、0.0 005）；胭脂红（1.0、y=478.28x+0.4 182、0.9 997、0.0 005）；诱惑红（1.0、y=744.64x+0.2 686、0.9 995、0.0 005）；赤藓红（1.0、y=108 5.1x+0.1 080、0.9 997、0.0 002）；新红（1.0、y=1 526.2x+0.3 276、0.9 999、0.0 005）； 亮 蓝（1.0、y=185 1.7x+0.1 080、0.9 995、0.0 002）

图1 八种色素标准色谱图

表1 精密度和回收率测定结果

2.5 方法回收率和精密度

称取5g样品，分别做高中低3个浓度标样，添加柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红、赤藓红、亮蓝8种合成色素标准品，每个浓度重复6次，按试品制备方法处理后，进行测定，结果见表1，表明该方法准确可靠。

3 结论

对糕点类样品中常用的8种食用合成色素进行研究，大大减少了样品处理步骤和工作量，可有效降低误差，优化样品前处理条件。通过对测定波长进行确认，能达到很良好的基线分离，方法回收率在95～101之间，相对标准偏差RSD＜2，检出限柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、新红、诱惑红为0.0 005 mg/kg，赤藓红、亮蓝为0.0 002 mg/kg，完全能满足样品的分析要求。

[1]中华人民共和国卫生部.GB 2760-2014 食品安全国家标准 食品添加剂使用卫生标准[S].北京：中国标准出版社，2014.

[2]中华人民共和国卫生部.GB 5009.35-2016 食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定[S].北京：中国标准出版社，2016.