孙妩弋，孙家昌，厉歆然，彭文婷，魏 伟

(安徽医科大学临床药理研究所，抗炎免疫药物教育部重点实验室，抗炎免疫药物安徽省协同创新中心，安徽 合肥 230032)

β-arrestin2属于Arrestin家族的一种调控蛋白，其基因编码为Arrb2，是在提纯β肾上腺素受体激酶的过程中被发现的。它不仅可以调节G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors, GPCRs)的脱敏和内化[1]，还可以对酪氨酸激酶受体(tyrosine kinase receptor，TKR)、丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)等介导的信号转导产生一定影响，在细胞的增殖、凋亡及炎症反应中都起着至关重要的作用[2]。β-arrestin2广泛分布于各个组织器官，在恶性肿瘤、纤维化等多种疾病中，发挥重要的调控作用，使其成为研究热点[3]。Arrb2基因敲除模型可以利用敲除编码β-arrestin2的基因，从整体水平研究β-arrestin2蛋白的功能。本文针对Arrb2基因敲除小鼠的繁育和基因型鉴定，对其方法学进行探讨和优化，旨在为相关机制的研究建立更好的Arrb2敲除动物模型。

1 材料

1.1实验动物Arrb2基因敲除型(KO)纯合子(-/-)小鼠，♂，购自美国Jackson 实验室，为C57BL/6J遗传背景。野生型(wide type，WT) C57BL/6J小鼠购自中国科学技术大学生命科学学院实验动物中心。实验动物均在无特定病原体(specific pathogen free，SPF)级条件动物房饲养及繁育。所有实验动物的操作及饲养均符合国标及安徽省实验动物管理饲养条例。

1.2试剂Genotyping Mix(美国Kapa Biosystems公司)；琼脂糖凝胶(美国Genetech公司)；Proteinase K(美国Sigma Aldrich公司)；异丙醇(上海试剂一厂)；RIPA蛋白裂解液、苯甲基磺酰氯(phenylmethyl sulfonylfluoride，PMSF)、5×电泳加样缓冲液(碧云天生物技术公司)；抗β-actin抗体、抗β-arrestin2抗体(美国Santa Cruz公司)；辣根酶标记山羊抗小鼠IgG(北京中杉金桥生物公司)；ECL化学发光试剂盒(美国Pierce Biology公司)。……