杜 鹃，闫德俊，杨云云，陈 硕，魏 圆，沈 兵

(安徽医科大学基础医学院生理学教研室，安徽 合肥 230032)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最严重的并发症之一，也是糖尿病患者死亡的重要原因[1-2]。肾血流动力学异常是DN早期的重要特点，表现为肾小球高压、高灌注和高滤过，这些异常情况长期存在使肾小球系膜基质及基底膜合成增加、降解减少，引起肾小球硬化，最终导致DN的发生[3]。肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells，GMCs)位于肾小球毛细血管袢内，具有类似于血管平滑肌的多种功能，其收缩功能可通过改变毛细血管口径，影响肾小球血流量和滤过面积，调节肾小球滤过率(glomerular filtration rate, GFR)[4]。已有报道，GMCs的功能失调与包括糖尿病慢性肾病在内的多种肾脏疾病相关[5-6]。

钙库操纵的钙内流(store-operated Ca2+entry，SOCE)途径参与引起GMCs的Ca2+内流、产生收缩效应[4,7]。Orai1和STIM1是SOCE的两种主要通道蛋白。我们前期研究证实，STIM1和Orai1表达于GMCs，利用siRNA干扰降低STIM1或Orai1表达可明显抑制原代培养的GMCs的SOCE水平[8]。Ca2+内流，引起局部Ca2+浓度升高，可迅速激活下游信号分子——大电导钙激活的钾通道(large conductance calcium activated potassium channel, BKCa)[9]。研究发现，BKCa也参与调节GFR[10]。但在GMCs中，SOCE与BKCa之间的相互关系以及高糖环境对其的影响并不清楚。本研究拟采用原代培养的大鼠GMCs作为研究对象，揭示GMCs中BKCa-Orai1之间是否存在物理性与功能性的相互作用，以及高糖培养模拟糖尿病对BKCa与Orai1在GMCs表达及其介导的功能的影响，从而为BKCa-Orai1相互作用在DN发病中的作用提供相关的理论依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 清洁级♂SD大鼠，体质量(150～180) g，由安徽医科大学实验动物中心提供，动物实验严格遵照《实验动物质量管理方法》和《中华人民共和国实验动物管理条例》法规，并经安徽医科大学校动物伦理委员会同意。……