李 颖， 黎 立，李俊玲， 张俊忠， 王世立

(1. 山东中医药大学附属医院，山东 济南 250011;2. 天津市安定医院，天津 300222；3. 济南大学、山东省医学科学院医学与生命科学学院，山东 济南 250022 ；4. 山东省医学科学院山东省医药生物技术研究中心，山东 济南 250062)

骨折固定的稳定性决定了骨折端的力学环境，力学环境是影响骨折愈合的重要因素之一。骨折断端绝对稳定并不利于骨折愈合，而在应力下骨折端适度的微动既能促进骨折愈合，又能恢复关节功能[1]。但是，骨断端的力学环境对骨折愈合产生影响的细胞和分子机制尚不清楚。在本课题组的前期研究[2]中，初步探索了在骨折愈合的早期，不同力学环境对间充质干细胞(mesenchymal stem cells ，MSCs)在骨折断端的募集所产生的不同影响，印证了不同力学环境对骨折愈合的影响是与其影响MSCs的募集有关的。为进一步研究力学环境影响骨折愈合的相关机制，本实验以股骨骨折大鼠，以不同刚度系数的外固定架固定，进而使骨折端产生不同的力学环境，从MSCs分化的角度探索骨断端的力学环境对骨折愈合产生的影响。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 SD大鼠，♂，SPF级，体质量(280～300) g，购自山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK(鲁)2015-0017。

1.1.2试剂 RNase-free water(武汉博士德)，One-step SYBR RT-PCR试剂盒(TaKaRa)，TRIzol(Invitrogen)，Runx2兔抗大鼠一抗(Cell Signaling Technology)，Sox9兔抗大鼠一抗(Abcam)。

1.1.3仪器 TDL-40B台式离心机(飞鸽)，WDW-5H生物力学测试机(济南华兴)，KD-T53全自动脱水机、KD-BL冷冻包埋台、KD-BM石蜡包埋台、KD-P摊片机(浙江金华科迪)，HM315切片机(Microm)。

1.2动物模型的构建将大鼠随机分为低……