芒果LAR基因的克隆及其表达分析
2018-06-07赵志常高爱平黄建峰罗睿雄刘宽亮
赵志常, 高爱平, 黄建峰, 罗睿雄, 刘宽亮
(1.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部华南作物基因资源与种质创制重点开发实验室,海南儋州 571737;2.国家热带果树品种改良中心,海南儋州 571737; 3.海南大学农学院,海南海口 570228)
无色花青素还原酶(leucoanthocyantin reductase,简称LAR)催化黄烷3,4二醇转化为2,3-反式黄烷三醇,比如生成儿茶素、没食子儿茶素等[1-2]。目前已从拟南芥、茶树、苜蓿、甘肃红豆草、黑枸杞、百脉根等多种植物中克隆得到LAR基因[3-9]。LAR是由花青素还原酶(anthocyanidin reductase,简称ANR)经过MYB转录因子家族共同调控的,对其酶活性的检测也有相关的报道,如在蒺藜苜蓿中编码LAR的基因已经鉴定,并进行了重组LAR经体外纯化后的活性检测,而与金钱草的叶子纯化过的酶活相比非常低;也有研究表明,不能检测到莲属植物中重组LAR的任何活性,除非体系中只有单一蛋白且用无色花青素作底物时,可以检测到LAR的微弱活性[2]。芒果(Mangiferaindica)是重要的热带、亚热带果树,其果实色彩多样,如绿色、黄色、浅黄色、红色、橙红色等[10]。芒果果实中含有黄酮类、类胡萝卜素和花青素等物质。芒果果实的LAR基因的研究工作未见报道,本研究采用RACE方法从芒果的果实中克隆得到1个LAR基因,深入探讨该基因在芒果果实原花色素合成的作用机制及其对果实果皮的影响,借以深入揭示该基因在芒果果实作用的分子机制,为芒果果实生产提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
在贵妃芒果完全成熟变黄时,用刀片取其果皮,切碎放入采样袋中用液氮速冻后立即放入-80 ℃冰箱内保存备用。……
