少孢节丛孢菌几丁质酶AO-801基因的分子特征分析及其多克隆抗体制备
2018-06-07贡莎莎孟庆玲钟文强才学鹏
江苏农业科学 2018年10期
贡莎莎， 孟庆玲， 乔 军， 钟文强， 陈 英， 才学鹏
(1.石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003； 2.中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州 730046)
现有的研究发现，捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌产生的侵染性胞外蛋白酶在其侵染线虫时能够发挥重要作用[1-5]。然而，以往的研究多集中在探讨捕食线虫性真菌胞外酶丝氨酸蛋白酶的机制和功能上，鲜有对捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌的几丁质酶的相关报道。Yang等已经从少孢节丛孢菌(Arthrobotrysoligospora)全基因组中鉴定出16个开放阅读框(ORF)编码假定的几丁质酶[5]，对其进行功能结构域、分子量和转录分析表明，大多数几丁质酶在碳源缺乏、含有几丁质底物或植物病原真菌时表达量上调，提示少孢节丛孢菌几丁质酶可能发挥重要作用。
少孢节丛孢菌是目前研究最多的一种捕食线虫性真菌，在自然界中广泛分布[2]。2011年，Yang等首次对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌进行了全基因组测序[4]，对基因组编码的侵染性胞外蛋白酶进行了生物信息学分析，共发现和鉴定出16个几丁质酶，然而这些几丁质酶的生物学功能尚未被深入研究。为了研究少孢节丛孢菌在侵染线虫中高表达的几丁质酶AO-801的生物学功能，本研究对少孢节丛孢菌 XJ-A1 几丁质酶AO-801基因进行克隆，并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达，拟纯化获得重组AO-801蛋白酶，制备高效价的多克隆抗体，为研究少孢节丛孢菌中该蛋白酶作用的分子机制奠定前期基础。
