金银花黄酮合成酶LjFNS基因克隆及序列分析
2018-06-07杨总应蒋向辉
杨总应, 蒋向辉
(凯里学院化学与材料工程学院,贵州凯里 556011)
金银花(Lonicerajaponica)别称忍冬,2015年版《中华人民共和国药典》规定其为忍冬科忍冬属忍冬干燥花蕾或带初开的花[1]。金银花原产于我国山东、河北、河南等省,近年来在湖南、贵州、四川等省均有引种栽培。金银花性味甘寒,具有清热解毒、去风热等功效,近年来研究发现,金银花在降血脂、调节人体免疫与抗病毒方面有特殊的疗效[2]。随着以金银花为主要原料的一系列药用与保健产品的开发,金银花的市场价值越来越重要。金银花含有140多种化合物,挥发油类、绿原酸类、黄酮类、三萜类是其主要成分,其中黄酮类化合物有木犀草素-7-O-α-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-半乳糖苷、5-羟基-3′,4′,7-三甲氧基黄酮、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、金丝桃苷等[3-4]。
笔者所在实验室曾以金银花为试验材料,采用差异表达的方法克隆得到LjFNS基因的中间序列(GenBank登录号JQ716370.1),测序后利用美国国立生物技术信息中心(national center for biotechnology information,简称NCBI)的Blast分析软件进行序列相似性搜索,发现该序列与拟南芥基因组中的细胞色素P450基因的序列相似。为了进一步研究该基因在金银花生长发育中的功能,本研究采用染色体步移方法,以金银花为试验材料,克隆得到该基因的基因组序列和编码序列(coding sequence,简称CDS),在对序列进行生物信息学分析的基础上,采用实时荧光定量PCR(qPCR)的方法分析LjFNS在金银花茎、叶与花等不同组织以及幼叶、老叶、白花与黄花等不同发育时期的表达特性。
1 材料与方法
1.1 试验材料
本试验中采用的金银花采自怀化学院药用植物园,金银花植株于2012年引自河南省新乡市,经怀化学院刘光华教授鉴定为忍冬属植物金银花。……
