杨 雪，刘 琳，赵 丹，张湘燕△

(1.贵州医科大学，贵阳 550000；2.贵州省人民医院，贵阳 550000)

肺炎克雷伯菌是临床最常见的条件致病菌之一，可引起肺炎、尿路感染、败血症、伤口感染、脑膜炎等[1]。近年来随着抗菌药物的广泛应用，尤其是第3代头孢菌素及碳青霉烯类的不合理使用，导致细菌出现严重的耐药性。2015年我国耐药细菌监测网提供的数据显示，全国肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类的耐药率为7.6%，各省为0.5%～20.0%，均较2014年有所增加[2]。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenemresistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的感染增加了临床治疗的难度和患者预后风险。本研究收集37株CRKP菌株，检测相关耐药基因，采用多位点序列分型(MLST)对其进行分子流行病学研究，以揭示其耐药克隆的特征，以期为防治CRKP的传播提供参考依据。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1菌株来源 随机选取2016年2月至2017年2月贵州省人民医院临床分离到的CRKP，排除同一患者重复菌株，共37株。标本来源包括痰液、血液、中段尿、腹腔积液等。菌株经美国BD公司Phoenixtm-100全自动微生物分析系统检测。

1.1.2主要试剂 药敏纸片及M-H平板均购自英国Oxoid公司，0.5 mol/L的EDTA溶液为本室所有；2×Taq Master Mix和离心柱型细菌基因组 DNA 提取试剂盒均购自北京康维世纪有限公司。所有引物均由上海生工生物工程公司合成。

1.1.3主要仪器 全自动微生物鉴定仪购自美国BD公司，PCR扩增仪购自美国ABI公司，电泳仪购自北京六一仪器厂，凝胶成像仪购自美国Alpha Innotech公司。

1.2方法

1.2.1细菌鉴定、药敏试验及表型确证 采用Phoenixtm-100全自动微生物分析系统进行细菌鉴定，用微量肉汤稀释法测定13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)，结果判定按美国临床实验室标准化研究所(CLSI)2015年版标准执行；……