魏明波

(武汉大学中南医院口腔科，湖北 武汉 430071)

牙龈蛋白酶是牙龈卟啉单胞菌分泌出的半胱氨酸蛋白酶，其中精氨酸牙龈蛋白酶(RGP)、赖氨酸牙龈蛋白酶(KGP)两种亚型可降解人牙龈成纤维细胞、上皮细胞，诱导细胞凋亡〔1〕。整合素α5、β1蛋白分布于细胞表面通过非共价键结合的二聚体，调节成骨细胞增殖和分化〔2〕。成骨细胞作为牙周组织主要成分之一，其代谢情况对牙周组织退化、修复具有重要意义〔3〕。老年人多因牙周组织退化导致牙齿松动和脱落，对日常生活造成不良影响。本研究主要探讨整合素α5、β1在牙龈蛋白酶诱导人成骨细胞凋亡中的表达变化及其作用机制。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 人颅骨成骨细胞(HCO)，HL-60细胞购于上海斯信生物科技有限公司；牙龈卟啉单胞菌W83购于上海继和生物科技有限公司；胎牛血清，α-mem液体培养基购于上海源叶生物科技有限公司；脑心浸液肉汤购于上海星科生物科技有限公司；生物素原位缺口末端标记法(TUNEL)试剂盒，膜蛋白提取试剂盒购于北京百奥莱博科技有限公司；磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(AKT)信号通路抑制剂LY294002，兔整合素α5抗体，鼠抗人整合素β1抗体，山羊抗兔免疫球蛋白(Ig)G购于上海远慕生物科技有限公司。

1.2HCO培养和牙龈蛋白酶提取 用含10%胎牛血清、1%青霉素和链霉素的α-mem液体培养基，5%CO2培养箱中孵育HCO，取对数生长期细胞进行实验。用含0.5%酵母提取物、300 g/L维生素K、2 mg/L的氯化血红蛋白的脑心浸液肉汤，在70%N2、5%CO2、5%H2的厌氧罐中孵育牙龈卟啉单胞菌，取对数生长期细菌培养液上清提取纯牙龈蛋白酶，酶标仪显示，牙龈蛋白酶中RGP活性浓度(42.85±3.22)U/L，KGP活性浓度为(1.13±0.36)U/L，本次实验中使用两者的混合物。……