柴 瑛

(佳木斯大学附属第一医院骨科，黑龙江 佳木斯 154002)

骨肉瘤主要发生于骨骼的生长和修复区域。尽管骨肉瘤的诊断和治疗已取得了重大进展，但由于常出现复发和转移，患者5年生存率仍然很低〔1，2〕。白细胞介素(IL)-8是一种血管生成趋化因子，在许多人类恶性肿瘤如直肠癌、宫颈癌、乳腺癌、胃癌等均可检测到高水平IL-8表达，同时高水平的IL-8也被认为可参与肿瘤的血管生成、细胞转移及复发等恶性行为〔3〕。本实验研究IL-8对骨肉瘤细胞增殖及迁移的作用及其机制。

1 资料与方法

1.1一般资料 2015年6月至2017年7月佳木斯大学附属第一医院57例骨肉瘤患者和年龄、性别匹配的41例正常健康人为研究对象。骨肉瘤患者中男26例，女31例；临床Ⅰ级17例、Ⅱ级21例、Ⅲ级19例；肿瘤浸润T1、T2和T3阶段分别为22、18和17例。年龄46～66岁，平均61.43岁。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2实验材料及试剂 DMEM基培养基及胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；重组人IL-8购自美国PeproTech公司；细胞计数试剂盒(CCK)-8和IL-8酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒购置武汉博士德公司；细胞迁移(Transwell)小室购自美国Corning公司；细胞外信号调节激酶(ERK)抗体购自美国Santa Cruz公司。

1.3ELISA实验 清晨空腹抽取静脉血3 ml，离心后收集血清；按IL-8 ELISA试剂说明书操作后利用酶标仪测取吸光度450 nm；绘制标准曲线计算样本血清IL-8浓度。

1.4CCK-8实验 将培养于96孔板(3×103个/孔)中的143B细胞分成5组，各组细胞所用培养基为含5% FBS和不同浓度重组人IL-8(0、20、40和60 ng/ml)的DMEM培养基。待细胞培养至24、48 h行CCK-8实验。

1.5Transwell实验 将143B细胞培养于Transwell上室(1.5×104个/室)，上室中培养基为不含FBS的DMEM培养基，下室中培养基为含5%FBS和不同浓度重组人IL-8(0、20、40、60和 80 ng/ml)的DMEM培养基。待……