李慧聪

(河南大学淮河医院，河南 开封 475000)

慢性肾脏损伤中肾小管间质纤维化是共同病理特征，在原发性或继发性肾脏疾病中，肾小管间质纤维化程度是决定肾功能恶化水平的主要因素〔1〕。因此，早期抑制或逆转肾小管间质纤维化对延缓肾脏损伤向终末期发展具有重要意义。肾间质肌成纤维细胞是构成胞外基质的主要细胞，肾小管上皮间充质转分化是病理状态下肌成纤维细胞增多的主要机制之一〔2，3〕。相关研究显示，肾小管间质纤维化过程中肾小管上皮间充质转分化发挥重要作用，该过程在一定条件下具有可逆性〔4〕。但目前肾小管间质纤维化的相关调控机制仍未明确，尚缺少有效的干预靶点。近年来研究发现miR-196a不仅对肝癌、胰腺癌等癌细胞具体调控作用，其高表达还可诱导肾小管上皮间充质转分化〔5，6〕；蛋白二硫化物异构酶(PDI)A3是调控人线粒体氧化应激的主要蛋白之一，前期生物信息学筛选发现PDIA3可能为miR-196a的直接靶基因。本研究旨在验证miR-196a与PDIA3的互补配对关系，探讨miR-196在肾小管间质纤维化过程中的作用机制。

1 材料与方法

1.1材料与试剂 人肾小管上皮细胞(HKC) 购于上海匹拓生物科技有限公司；清洁级ICR小鼠，7～9周龄，体质量24～27 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。DMEM培养基、胎牛血清购于北京雅安达生物技术有限公司；转化生长因子(TGF)-β1购于江苏凯基生物技术股份有限公司；兔抗人α-血管平滑肌肌动蛋白(SMA)单克隆抗体、兔抗人PDIA3/ERp57多克隆抗体购于上海信裕生物科技有限公司、LNA修饰的anti-miR-196a、pre-miR-196a购于广州赛诚生物科技有限公司。……