李琨琨 吴慧丽

(郑州大学附属郑州中心医院消化内科，河南 郑州 450007)

常见的治疗结肠癌方法有手术治疗、放疗及化疗，由于结肠癌具有易转移、易复发、早期发病隐匿等特点，结肠癌仍然严重威胁人类生命健康〔1～4〕。肝素酶(Hpa)具有降解硫酸肝素多糖的作用，属于葡萄糖醛酸内切酶，而硫酸肝素多糖是血管基质和细胞外基质的主要成分之一，在肿瘤转移过程中发挥促进作用〔5〕。近年研究表明，OGT2115是Hpa的特异性抑制剂，能够抑制胆囊癌、乳腺癌等转移和侵袭〔6，7〕。目前OGT2115对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响尚不清楚。本研究以结肠癌细胞为研究对象，通过噻唑蓝(MTT)法、细胞划痕实验、Transwell小室等实验技术手段探讨Hpa抑制剂OGT2115对结肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响。

1 材料与方法

1.1材料 结肠癌细胞SW480购自郑州大学，基质金属蛋白酶(MMP)-2多克隆抗体、MMP-9多克隆抗体、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)单多克隆抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗均购自美国Proteintech公司；二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度检测试剂盒购自北京天根公司；胎牛血清、RPMI1640、胰蛋白酶均购自美国Gibco；肝素酶抑制剂OGT2115购自美国Tocris Bioscience；Hpa活性检测试剂盒购自上海纪宁实业。

1.2细胞培养 取出保存在液氮中的SW48细胞，在37℃的水浴中融化，加入细胞培养液(含有10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，0.1 mg/ml链霉素的RPMI1640)，1 000 r/min离心10 min，弃上清，加入细胞培养液悬浮细胞，接种到细胞培养瓶中，放在37℃，5%CO2培养箱中培养。待细胞融合度达到90%，吸除细胞培养液，加入0.25%的胰蛋白酶，消化2 min，1 000 r/min离心10 min，弃上清，加入细胞培养液，根据实验要求按照不同比例接种到细胞瓶中继续培养。……