孟庆敏 余 莹 孔 静 刘玲伶 田平平 郭 兵 肖 瑛 王圆圆 石明隽

(贵州医科大学病理生理学教研室，贵州 贵阳 550004)

糖尿病(DM)肾病(DN)是DM常见而严重的并发症之一，然而DN的确切发病机制尚不清楚。肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化(EMT)在肾小管间质纤维化的发生发展中起着重要作用〔1～3〕。 wnt信号通路是诱导EMT发生的一条关键信号通路。目前大量的研究表明wnt信号通路的异常激活参与了肺、肝、心脏、皮肤及肾等很多器官纤维化时的EMT过程〔4，5〕。分泌型卷曲相关蛋白家族(sfrps)因为与wnt信号通路的受体Frizzled的CRD区域同源而被认为是wnt信号通路的一类拮抗因子。本实验旨在观察sfrp-1在DN小鼠肾组织中的表达变化，探讨DN时sfrp-1在DN肾纤维化发生发展中的作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1主要材料、试剂 链脲佐菌素(STZ)购自美国Sigma公司；聚偏二氟乙烯膜(PVDF)膜、增强化学发光法(ECL)显色剂、蛋白浓度测定试剂盒二喹啉甲酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天，蛋白质Marker购自北京索莱宝公司；两步法免疫组化检测试剂、辣根过氧化物酶标记羊抗兔免疫球蛋白(Ig)G、辣根过氧化物酶标记羊抗小鼠IgG均购自北京中杉全桥生物技术有限公司；β管家基因(β-actin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、胶原蛋白(col-Ⅲ)、wnt4、β-连环蛋白(β-catenin)、sfrp-1均购自北京博奥森公司；sfrp-1逆转录试剂盒为Thermo产品；sfrp-1实时荧光聚合酶链反应(Real-time PCR)试剂盒为北京天根系列产品。

1.2动物模型复制、分组和标本收集 雄性清洁级昆明小鼠购自贵州医科大学动物中心，动物批号：SCXK(黔)2012-0001；昆明小鼠在清洁环境下给予正常饮食及自由饮水适应性喂养1 w，检测尿蛋白和尿糖定性为阴性；……