厉 菁 袁义强 张 宇 张 华 张传西 宣学习 王明杰

(郑州市第七人民医院心内科，河南 郑州 450006)

心肌细胞凋亡是引起各种慢性心力衰竭、心脏功能恶性的主要因素〔1〕。microRNA(miRNA)通过对其靶基因的表达调节，参与细胞增殖、凋亡、分化等生物学行为，也可参与多种疾病的发生发展〔2～4〕。miR-92a是miRNAs家族中的一员，有研究表明，miR-92a在诱导缺血后的组织中表达明显升高〔5〕，心肌梗死模型中抑制miR-92a的表达可降低心肌梗死面积、改善心肌梗死后重塑和新生血管形成，从而促进心脏功能的恢复〔6〕。关于miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞增殖凋亡的影响尚未清楚。本研究将miR-92a的抑制物(inhibitor)转染H2O2诱导的H9C2心肌细胞，检测心肌细胞的增殖凋亡情况及其作用机制。

1 材料与方法

1.1细胞株及主要试剂和仪器 大鼠心肌细胞H9C2购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清、DMEM培养基均购自美国Hycloneo公司；B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、c-Myc抗体均购自美国Epitmics公司；H2O2、细胞增殖及毒性检测(CCK8)试剂盒、膜联蛋白(Annexin)V-异硫/碘化丙锭(PI)细胞凋亡试剂盒均购自中国碧云天试剂公司；二喹啉甲酸(BCA)试剂盒购自Thermo公司；Trizol、荧光定量-PCR试剂盒均购自日本TAKARA公司；酶标仪购自美国Bio Tek公司；实时荧光定量(RT)-PCR仪购自瑞士Roche；流式细胞仪购自美国Bio-Rad公司。

1.2细胞培养 取出在液氮罐中保存的H9C2心肌细胞，置于37℃水浴锅中快速融化，用含有10%胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。细胞达到80%～90%融合生长时，弃去旧的培养液，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞3次，胰蛋白酶消化细胞，细胞由梭形变为圆形时倒掉胰蛋白酶，加入培养基终止消化。……