臧玉柱 于润红 白炎亮 李玉龙 陈玉清 张 茵 孙 恺

(河南省人民医院血液科，河南 郑州 450003)

急性T淋巴细胞白血病是白血病中较为常见的一种，目前尚没有特异性的治疗手段，患者经过造血干细胞移植和化疗后，5年的生存率仍然不高于40%〔1,2〕。第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)是一种具有磷酸酶活性的抑制癌症发生的基因，能够诱导多种癌细胞凋亡，对于癌细胞的生长、转移等也具有调控作用〔3,4〕。有研究表明，PTEN在白血病细胞中低表达，并且能够调控白血病细胞侵袭能力和血管新生能力〔5〕。本研究旨在探讨PTEN对急性T淋巴细胞白血病细胞生长和凋亡的影响。

1 材料与方法

1.1材料 PTEN过表达载体(pEGFP-PTEN)和对照空载体(pEGFP)由河南省人民医院病理实验室构建并保存。PTEN、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)引物均由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。Lipofectamine2000为美国Invitrogen公司产品；胎牛血清、RPMI1640培养基均为美国Gibco公司产品；二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒为美国Thermo公司产品；碘化丙啶(PI)、膜联蛋白(V-FITC)、噻唑蓝(MTT)、二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)均为美国Sigma公司产品；PTEN单克隆抗体为美国millipore公司产品；β-连环蛋白(β-catenin)单克隆抗体、c-myc单克隆抗体、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3单克隆抗体均为美国ABGENT公司产品。

1.2细胞培养 急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat购自中科院细胞库。将保存于液氮中的Jurkat细胞在37℃融化后，加入10%胎牛血清的RPMI1640细胞培养液，800 r/min离心10 min，吸除上清液，用3 ml的细胞培养液悬浮后，种植于细胞培养瓶中，在37℃，饱和湿度，5% CO2培养箱中培养。……