宋云林，谭秋婵，马燕，白林林，柴瑞峰，王毅，于湘友

血管内皮祖细胞（EPC）是干细胞移植治疗缺血性疾病的重要种子细胞，目前基础研究已有一定进展，但长期疗效值得商榷，其中EPC复制性衰老可能是影响其长期疗效的重要因素。p53可诱导细胞周期阻滞引起衰老或凋亡；沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）参与了多种重要的抗衰老基因的调控，能使p53蛋白活性下降；微小核糖核酸（miR）-34a能抑制SIRT1及细胞周期调节蛋白等的基因表达，进而加速细胞衰老；故推测p53-miR-34a-SIRT1反馈环在细胞衰老过程中起着重要作用[1]。同时，活化后的p53也能增加miR-34a的表达，进一步强化对细胞凋亡的调控作用。另一方面，miR-34a通过抑制SIRT1的产生，从而促进p53的活化[2,3]。故由此推测p53-miR-34a-SIRT1形成的正反馈环在细胞凋亡和增殖的过程中扮演者重要的角色。本研究的目的为明确p53-miR-34a-SIRT1在EPC复制性衰老过程中的反馈调节机制，评估miR-34a抑制因子能否成为延缓EPC衰老的靶点，为提高EPC治疗缺血性疾病的疗效提供理论依据。

1 材料与方法

材料：20份脐血，每份50 ml（来源于暨南大学附属第一医院，均签署知情同意书并获医院科研伦理委员会同意）。

试剂及仪器：EGM-2培养基（Lonza公司，瑞士）；人淋巴细胞分离液（LymphoprepTM，Axisshield 公司，挪威）；胰蛋白酶（Tryptase，Sigma 公司，美国）；小鼠抗人CD34单克隆抗体（BD公司，美国）；小鼠抗人CD133单克隆抗体 （Miltenyi公司，德国）； 小鼠抗人p53单克隆抗体、小鼠抗人乙酰化p53（Ac-p53）单克隆抗体和兔抗人SIRT1多克隆抗体（CST公司，美国）；细胞周期检测试剂盒和AnnexinV/PI 细胞凋亡检测试剂盒（凯基生物有限公司，中国）；β-半乳糖苷酶染色试剂盒（碧云天生物技术研究所，中国）；……